目的基因验证 课件.ppt

目的基因验证 酶切验证方向 Sense Anti-sense Promoter Promoter Coding sequence Coding sequence NOS NOS 双酶切 单酶切 酶切位点的选择 1、载体上有，目的片段内部也有，但最好都分别只有一个位点； 2、目的片段上的酶切位点不要位于片段中央附近，要选取能够区分大小的位点； 1、用连接的两种酶验证；2、参照单酶切。 酶切验证方向的方法很灵活多变，具体情况具体分析。 pCxsn-PtWRKY60的方向验证 ATGGATGTCTTTCCCTCTTGCAAAGAAAAGGTGGAAGCTCTTCAATTCGAGTTGGAACACAGGCAGAAAGAGAATGAAAGTCTTAGATTTATGCTTGGAGTTATGACCAGAAGATTCAGCATTCTTCAAGCCGAGATTCAAGAAACCGAAGAACATCAACAAAAGACAGCTAGCAACTTAGCGGATGGAGATCAAGCTTGTCATGAAATCCTTGACTCGAACAAGAGAGCAAGATTTGAAGTTCCCATAACCAAGGCATCGAGAATCTTGGTGAGAAGTCACTCCAATGACAAGAGCCTGATTGTGAAAGATGGATATCAATGGAGAAAGTATGGCCAGAAGGTTACTAAGGATAACCCATCACCTCGAGCTTACTTCAGGTGTTCCATGGCTCCTAATTGCCCCGTCAAGAAGAAGGTCCAAAGATGTGTAGAAGATGATTCAGTACTTGTTGCAAGCTATGATGGAGAACACAACCATGAACCCAATGGTTCACATGGACAATATTTATGTTCTCCACATACCTCATCATCAAAAATTTCCATAACTAATCATGTCCTCAAGTGTCCAATCGAAATTCCTCCTCTTCAACCATCTATAGCTCTTGATCTTACTCTTTCAAGTCCCAGTAATCAACAGAAGGAAAATCCTTCTAAAAGATCCATGGAAGACTGCGGCAAGATTAATAATAACTGCAACAAGAACTACATTGAAGAATATGTGGCATCTTTAACTAAAGATCCTACCTTCTCTGTAGCTTTAGCTGCGGCTGTTGCAAGTTCAATGAGTGACCTGTCTTCGTCAAGAATGCTGTGA PtWRKY60 CDS序列 pCxsn载体 NEBcutter分析片段上的酶切位点 10ul体系酶切pCxsn-PtWRKY60 Plasmid: 8.75ul; M buffer: 1ul; HindIII: 0.25ul. 37℃水浴2-3h 1541bp 1117bp AS S 测序 测序的样本可以为：菌液、质粒、PCR产物、其他； 测序要提供测序引物； 一次反应大约可测800bp的长度，如果目的片段超过这一长度可以选择测通、双向，或者是单向walking等方法。 测序单 测序结果 波峰信号 序列信息 序列信息 测序结果和原序列比对结果 Identity=98.22% 波峰信号 谢 谢！