4第4章 遗传的制作和基因定位(下).ppt

4.5.2.5 中断杂交作图 一、中断杂交实验原理 基因从Hfr 细胞按次序转入F-细胞，可根据基因进入F-细胞的时间和次序制作基因图谱。 Wollman和Jacob于1954年在大肠杆菌中曾进行了以下杂交实验： Hfr：thr+leu+azsTislac+gal+strs× F-:thr-leu-azrTirlac-gal-strr把接合中的细菌在不同时间取样，并把样品猛烈搅拌以中断接合中的细菌，然后分析受体菌的基因型，这是在大肠杆菌等细菌中用来测定基因位置的一种方法。 4.5.3　细菌的转导和作画 1. 定义：以噬菌体为媒介所进行的细菌遗传物质重组的过程，称转导。 2. 发现 ●Lederbery及其研究生Zinder（1951）首先在鼠伤寒沙门氏菌（Salmenella typhimurium）中发现转导现象。 ??? ●发现过程 他们用苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸营养缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌和甲硫氨酸、组氨酸营养缺陷型的鼠伤寒沙门氏菌共同培养，相当让两种不同缺陷型的菌杂交。杂交过程和结果如下： 4.6 噬菌体的重组作图 4.6.1　噬菌体的结构和形态 二．λ噬菌体 1951年 Esther Lederberg 发现K12中有原噬菌体，并命名为λ。 附加体(episome) 合子诱导（zygotic induction） Hfr（λ）× F－ 无重组子 Hfr × F－（λ） 有重组子  4.6.2　噬菌体的重组作画 菌苔（lawn） 噬菌斑（plaque）  四、T2的环形遗传图 噬菌体的DNA环状排列与末端重复 一、线性DNA具有环状遗传图 末端重复也称末端冗余：是指T4或T2双链DNA分子两端带有相同的碱基序列。 环状排列又称致环交换。 环状排列与末端重复的形成 1）感染初期 2）感染后期 (3)把受体菌接种到不含thr的选择培养基上对thr+进行选择，凡具thr+的细菌都可生长，把此菌接种到其他培养基上，结果在选出的thr+重组子只有3% leu+，但无一个同时也是azi+ 。若选择leu+重组子，则约有50%同时也是azi+，因此3基因次序应为 thr+ leu+ azi+。P165 2.特异性（局限性）转导 １概念：只能转移细菌染色体特定部分基因的转导. 2 局限性转导的过程 3 转导的机制:是因为噬菌体在细菌染色体的特定位 点上整合。 4 低频转导与高频转导 噬菌体 ↓感染 供体菌→裂解液(转导噬菌体)→非溶源 (溶源菌) (10-6) 性细菌 溶源性转导子 重组性转导子 低频转导：指溶源性细菌经诱导所释放的噬菌体所 进行的转导. * * 4.5 细菌的遗传分析与基因定位 4.5.1　细菌的转化和基因定位 转化：指某些细菌能通过其细胞膜摄取周围供体的染色体片段，将此外源DNA片段通过重组加入自己染色体组的过程。 1928年，格里费斯(Griffith F.)在肺炎双球菌中发现转化现象。 1944年，阿委瑞(Avery O. T.)成功地进行了肺炎双球菌转化试验；证实遗传物质是DNA；转化是细菌交换基因的方法之一。 ??? 细菌中的大部分的转化工作是用下面三种细菌完成的：肺炎双球菌，枯草杆菌和流感嗜血杆菌。 转化主要分为二个步骤进行: (一)供体DNA与受体细胞间的接触与互作 肺炎双球菌转化：DNA片断至少有800个碱基对； 枯草杆菌的转化：DNA片断至少有16000个碱基对。 转化的第一步是使转化DNA与受体细菌间的成功地相互作用，这包括：转化片段的大小、形态、浓度和受体细胞的生理状态。 ①.转化片断的大小： ②.供体DNA分子存在的数目： 对特定基因来说，供体DNA分子数目与成功转化有关。 链霉素抗性基因转化：在每个细胞含有10个DNA分子之前，抗性转化体数目一直与DNA分子存在数目成正比。 原因：在细菌的细胞壁或细胞膜上有固定数量的DNA接受座位，故一般细菌摄取的DNA分子数小于10个。 ③．受体的生理状态： 受体细胞必须在生理上处于感受态。 这种感受态只能发生在细菌生长周期的某一时间范围内，在感受态内，活跃合成的蛋白质的细菌细胞壁多少发生改变而易于接受转化DNA。 ㈡、转化DNA的摄取和整合过程： 细菌中的转化，包括供体DNA的结合与穿入，联会和整合。 当细菌处于感受态时，外源双链DNA分子可结合在受体细胞表面的接受座位上。细菌在摄取外源DNA时，由D