感染性疾病及免疫学检测演示教学.ppt

呈世界性分布 极易慢性化，与肝硬化、原发性肝癌 关系密切 HCV （hepatitis C virus）丙型肝炎病毒 HCV特点 有包膜的单股正链RNA病毒 抗HCV抗体非保护性抗体 输血和非肠道途径传播 主要检测IgG 丙型病毒性肝炎(HCV)临床意义 HCV是输血后肝炎和散发性非甲非乙型肝炎的主要病原。HCV感染后可导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌等多种肝脏疾病。抗HCV阳性而血清中没有HCV RNA提示既往感染。 检测方法 常用检测方法为ELISA法，金标记免疫层析法和化学发光法。 检测方法： ELISA 化学发光 HIV (Human Immunodeficiency Virus)人获得性免疫缺陷病毒 我国历年艾滋病病毒感染者和病人数 HIV的结构特点 HIV-1和HIV-2 逆转录病毒 两股相同的正链RNA CD4 抗原 辅助受体 CD4+ 细胞 HIV gp120 结合CD4 / 辅助受体 病毒经黏膜或皮肤破损进入体内 感染黏膜或皮肤层树突状细胞 病毒于24小时内在树突状细胞繁殖 病毒于24-28小时到达局部淋巴结 病毒于5天内出现在外周血液中 每个感染细胞可产生5000个病毒颗粒，每人每天可产1010病毒。 HIV的检测 筛选试验：敏感性高，如ELISA，胶体金标记层析法。 确诊试验：特异性高，如蛋白印迹试验和IFA 抗体最早在感染后二周，最晚三个月会转为阳性 初筛试验2次阳性，再进行确认试验 样品 初筛检测 阳性反应 阴性反应 筛查试剂 复查 原有试剂加另一种筛选试剂 均阳性反应 一阴一阳 均阴性反应 送确认实验室确认 报告阴性 结果判断 确诊试验阳性，有临床症状，诊断为AIDS 确诊试验阳性，无临床症状，诊断为HIV感染者 确诊试验阴性，但初筛试验阳性或有临床症状， 3个月后复查 梅 毒 syphilis 是梅毒螺旋体引起的一种慢性传染病，本病的特点是病程的长期性和潜匿性，病原体可侵犯任何器官，临床表现出各种不同的症状。 三个阶段 一期梅毒：硬性下疳； 二期梅毒：梅毒疹； 三期梅毒：累及心、肝、神经系统、骨等。 后天性梅毒（获得性）： 95%性交 传播，少数因输血、接吻、医务人员不慎受染等直接接触传播。 先天性梅毒（胎传梅毒）： 梅毒螺旋体可自患病母体的血液经胎盘传给胎儿 传播方式 非梅毒螺旋体抗原血清试验：是以心磷脂、卵磷脂及胆固醇作为抗原检查血清中的反应素，用于初筛试验及疗效观察。可以分为以下四种试验，原理基本相同： 1、性病研究实验室玻片试验（VDRL) ：由于试剂需现配 现用，故而国内实验室很少采用。但VDRL是唯一可用于神经性梅毒诊断的血清学方法 2、快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR)：在特制的纸片 上进行，加入一定量特制的炭粉，可使抗原抗体出现 凝集，用肉眼可观察结果。 3、甲苯胺红试验（TRUST)：在试剂中加入甲苯胺红代替炭粉 颗粒，使结果更易于观察。 4、不加热血清反应素试验（USR) 梅毒的血清学试验（一） RPR TRUST VDRL 非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断 滴度：出现凝集反应的血清最高稀释倍数。 * 常见病毒性传染病及其免疫学检测 平顶山市妇幼保健院 传染病：是病原体以某种方式进入到人体后，并在人体内生长繁殖，释放毒素或导致机体内微生态平衡失调，给人体的组织和器官造成一定的损伤而引起的疾病。 病原体 易感人群 免疫学检验主要用于： 辅助诊断及鉴别诊断 判断疗效及预后 流行病学调查 常用的免疫学检测方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 金标法（试纸条、试纸板） 化学发光法 1.电化学发光（罗氏） 2.微粒子化学发光（雅培） 免疫印迹法 (Western blotting)? 凝集反应（梅毒检测) 酶联免疫吸附试验ELISA （enzyme linked immunosorbent assay） 是一类常用的免疫酶技术。是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。 常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP) 碱性磷酸酶（AP）。 基本步骤 包被 封闭 孵育 洗涤 显色 结果测定 缺点：1只是诊断的辅助手段，特异性和灵敏性有待提高。2操作过程有些繁琐，反应时间过长，不能一蹴而就。 凝集反应 凝集反应是指颗粒抗原与相应抗体结合反应出现的可见性现象。颗粒抗原如完整的细菌、红细胞等与相应抗体相混合，在一定条件下出现凝集。 化学发光免疫分析chemiluminescence