八单元微生物遗传教程.ppt

二、原生质体融合 概念：通过人为方法，使遗传性状不同的两细胞的原生质体发生融合，并进而发生遗传重组以产生同时带有双亲性状的遗传性稳定的融合子（fusant）的过程，称为原生质体融合。 适用范围：各种生物细胞都能进行原生质体融合，包括各种原核生物、真核微生物以及高等动植物和人体的不同细胞。 意义： 原生质体融合的优点： 可以提高重组率 双亲可以少带标记或不带标记 可进行多亲本融合 有利于不同种间、属间微生物的杂交 通过原生质体融合提高产量 1、选择亲株 2、制备原生质体 原生质体融合的主要步骤： 细菌：溶菌酶；酵母菌和霉菌一般用蜗牛酶或纤维素酶 3、原生质体融合 化学因子：PEG，物理因子：电融合技术 4、原生质体再生 5、筛选优良性状的 融合重组子 第七节 菌种保藏 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。 影响微生物菌种稳定性的因素： a）变异； b）污染； c）死亡； 一、菌种的衰退与复壮 菌种在培养或保藏过程中，由于自发突变的存在，出现某些原有优良生产性状的劣化、遗传标记的丢失等现象，称为菌种的衰退。 衰退的原因：①基因突变，②分离现象。 菌种衰退: 菌种的复壮： 1)从衰退的菌种群体中把少数个体再找 出来,重新获得具有原有典型性状的菌种。 2)有意识地利用微生物会发生自发突变的 特性,在日常的菌种维护工作中不断筛选 “正变”个体。 a)纯种分离； b)通过寄主体进行复壮； 二、防止衰退的措施 1)减少传代次数； 2)创造良好的培养条件； 3)经常进行纯种分离,并对相应的性状指标进行检查； 4)采用有效的菌种保藏方法； 三、菌种保藏 在一定时间内使菌种不死,不变,不乱 基本要求： 基本方法: 生活态 休眠态 培养基传代培养 寄主传代培养 冷冻 干燥 斜面,平板 液氮、低温冰箱 沙土管、冷冻真 空干燥 几种常用菌种保藏方法的比较 简便 简便 简便 简便有效 简便有效 3~6月 6~12月 1~2年 1~10年 5~15年以上 各大类 细菌、酵母菌 各大类** 产孢子微生物 各大类 低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养 干燥、无氧、低温、有保护剂 冰箱保藏法（斜面） 冰箱保藏法（半固体） 石蜡油封藏法* 沙土保藏法 冷冻干燥法 评价 保藏期 适宜菌种 主要措施 方法名称 菌种保藏机构的任务：广泛收集科研和生产菌种、菌株，并加以妥善保管，使之达到不死、不衰、不乱以及便于研究、交换和使用的目的。 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） 国内外菌种保藏机构： * 1928年，英国医生格里菲斯发现了转化现象； 1944年，艾弗里证明了转化现象的本质。 * 将E.coli分别培养在以放射性32PO43-或35SO42-作为磷源或硫源的组合培养基中，可以获得含32P-DNA的噬菌体或含35S-蛋白质的噬菌体。 将两种带有不同放射性的噬菌体分别感染寄主，10min后用捣碎器使噬菌体外壳脱离寄主细胞，离心后测定上清液和沉淀的放射性。 （1）含32P-DNA的一组：放射性85%在沉淀中 （2）含35S-蛋白质的一组：放射性75%在上清液中 * 杜连祥216 * 二）准性生殖（parasexual hybridization） 是真菌中不产生有性孢子而导致低频基因重组发生的一种繁殖方式。准性生殖常见于某些真菌，在半知菌中发生较多。 准性生殖它可以通过两个不同菌株体细胞的融合，不经过减数分裂，导致低频率的基因重组并产生重组子。 * 菌丝联结（anastomosis） 形成异核体（质配）（heterocaryon） 核融合（nuclear fusion）或核配（carryogamy） 体细胞交换（somatic crossing-over）和单倍体化 准性生殖过程： ①菌丝联结 ②形成异核体 一个菌株的细胞核进入到另一菌株的细胞中，不同遗传性状的核在同一细胞质中生长。 ③核配形成杂合二倍体 特点：频率低，10-5～10-7。 ④体细胞交换和单倍体化。 * 这类诱变剂都是一些碱基类似物，如5-溴尿嘧啶（5-BU）、5-氨基尿嘧啶（5-AU）、8-氮鸟嘌呤（8-NG）、2-氨基嘌呤（2-AP）和6-氯嘌呤（6-CP）等。 * 化学诱变剂有的可以直接引起碱基置换，有的则是间接引起置换。 直接引起碱基置换的诱变剂 是一类可以直接和核酸的碱基发生化学反应的诱变剂。 种类：亚硝酸、羟胺