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06浙江大学分子生物学试卷(含答案，90分以上)一、名词解释：(25%)?1、RFLP:限制性片段长度多态性，是由DNA变异(产生新的酶切位点或消除原有的酶切位点)导致在限制性核酸内切酶酶切时产生不同的长度片段。可借助Southern?Blotting或PCR的方法进行检测。2、SSR：简章序列重复多态性，引物是根据微卫星DNA重复序列两翼的特定短序列设计，用来扩增重复序列本身。由于重复的长度变化极大，所以是检测多态性的一种有效方法。其特点包括：一般检测到的是一个单一的多等位基因位点，共显性遗传，故可鉴别杂合子与纯合子；得到的结果重复性很高。3、EST：表达序列标签，是指从不同的组织构建的cDNA文库中，随机挑选不同的克隆，进行克隆的部分测序所产生的cDNA序列。随着高通量测序技术的进步，使人们越来越相信，大规模地产生EST，结合生物信息学的手段，将为人们提供一种快速有效的发现新基因的方法。4、STS：序列标签位点，是由特定引物序列所界定的一类标记的统称，短的在基因组上是可以被唯一操作的序列，因而可以确定在物理图谱上的特定位置。5、CAP:?CAP即分解代谢物基因活化蛋白是一种激活蛋白，因为细菌的许多启动子为弱启动子，本身与RNA聚合酶的作用较弱，在有CAP蛋白这类激活蛋白存在下，可使RNA聚合酶与启动子的亲和力增强，CAP蛋白的活性强烈依赖cAMP。?6、AFLP：扩增片段长度多态性，其特点是把RFLP和PCR结合了起来。其基本步骤是：把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3?端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3?端严格配对的片段才能得到扩增)，再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。7、SNP：单核苷酸多态性，是一种较为新型的分子标记，其依据的是一位点的不同等位基因之间常常只有一个或几个核苷酸的差异，因此在分子水平上对单个核苷酸的差异进行检测是很有意义的。8、FISH：荧光原位杂交技术，是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性，荧光信号的直观性和原位杂交的高准确性结合起来，通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂交，在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本进行检测和诊断，为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。9、Genome：基因组，有机体或细胞中的所有DNA，包括核中的染色体和线粒体中的DNA。10、RNA?in?situ?hybridization：RNA原位杂交，是利用cDNA为探针来检测与其互补的mRNA链在细菌或其他真核细胞中的位置，是检测基因组织特性表达的常用方法。11、单克隆抗体：每个B淋巴细胞有合成一种抗体的遗传基因。动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，含遗传基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活B细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。12、基因芯片：所谓基因芯片，是指将大量探针分子固定于支持物，上，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号的强弱进而判断样品中靶分子的数量。由于用该技术可以将极其大量的探针同时固定于支持物上，所以一次可以对大量的DNA分子或RNA分子进行检测分析，从而解决了传统核酸印迹杂交，技术复杂、自动化程度低、检测目的分子数量少、效率低，等不足，而且，通过设计不同的探针阵列，，用一定的分析方法，还可以用于序列分析，称作杂交测序。二、描述cDNA文库构建原理与方法（25%）：（1）cDNA获得方法，（2）克隆方法，（3）文库质量定义。答：?cDNA：以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA(complementary?DNA，cDNA)，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受菌体，扩增为cDNA文库(cDNA?library)，然后再采用适当方法从cDNA文库种筛选出目的cDNA。与基因组DNA文库类似，由总mRNA制作的cDNA文库包括了细胞全部mRNA信息，自然也含有我们感兴趣的编码cDNA。当前发现的大多数蛋白质的编码基因几乎都是这样分离的。?（1）?cDNA获得方法：Total?RNA的提取；mRNA的分离；cDNA双链合成：Superscipt?II—RT合成第一链，cD