单克隆抗体与肿瘤的导向治疗 课件.ppt

EB 病毒转化技术 细胞工程单克隆抗体技术 1 人-鼠杂交瘤单克隆抗体 2 人-人杂交瘤单克隆抗体 3 EB 病毒转化-融合技术 4 转基因动物制备单克隆抗体 5 重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体 人单抗制备技术的发展（新基因工程技术） （二）人源性单克隆抗体的制备 EB病毒（epstein-barr virus,EBv）是epstein和barr于1964年首次成功地将burkitt非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒，故名。EB病毒的形态与其他疱疹病毒相似 。 EB病毒仅能在B淋巴细胞中增殖，可使其转化，能长期传代。 EB 病毒转化技术 EB病毒转化淋巴细胞 1. 人-鼠杂交瘤单克隆抗体 　　　　人脾细胞＋鼠骨髓瘤细胞 细胞工程单克隆抗体技术 人脾细胞＋人骨髓瘤细胞 细胞种类少 2. 人-人杂交瘤单克隆抗体 利用EB病毒转化B淋巴细胞为永生细胞 与鼠骨髓瘤细胞融合 3.EB 病毒转化-融合技术 人抗体基因(除CDR)导入小鼠胚胎 转基因小鼠 抗原免疫 标准杂交瘤方法 4. 转基因动物制备单克隆抗体 转入人的Ig基因组 免疫动物 人抗体 基因敲除小鼠 将小鼠Ig基因敲除，转染人Ig基因，在小鼠体内产生人Ab，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体 SCID: severe combined immunodeficiency mouse 既无有功能的T细胞也无B细胞的小鼠,对异源移植物不产生任何排斥反应,可以作为良好的载体系统用于医学及生物学各个领域的研究,但极易感染病菌,饲养和操作管理十分复杂。 5. 重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体 SCID 将人淋巴细胞移植到体内 将人淋巴细胞移植到小鼠体内 抗原免疫 标准杂交瘤方法或制备抗体库 重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体 T淋巴细胞功能缺陷 1962年偶然发现有个别无毛小鼠， 后来证实是由于基因突变造成的并伴有先天性胸腺发育不良，称为裸小鼠(nude mice)，用“nu”表示裸基因符号。裸小鼠是由于染色体上等位基因(第11对染色体上)突变引起的，已失去正常胸腺。 裸 鼠 裸小鼠的主要特征表现为无毛(hair less)和无胸腺(athymus)。随着鼠龄增加皮肤变薄、头颈部皮皱褶、发育迟缓。由于无胸腺,仅有胸腺残迹或异常上皮,这种上皮不能使T细胞正常分化，缺乏成熟T细胞的辅助、抑制及杀伤功能，因而细胞免疫力低下。裸小鼠B淋巴细胞正常，但功能欠正常 特 性 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 单克隆抗体与肿瘤的导向治疗 冯冰虹教授 一、单克隆抗体 1890年：Behring和北里柴三郎等发现了白喉抗毒素，并建立了血清疗法，开抗体制药之先河。 1937年：Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、甲种（?）球蛋白、乙种（ ? ）球蛋白和丙种（ ? ）球蛋白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。 20世纪60年代初期：抗原决定簇，精制单价血清。 第一节 概述 1975年：K?hler和Milstein等，单克隆抗体，其具有高度特异性、均一性，以及来源稳定可大量生产等特点。 1984年：人-鼠嵌合抗体 1984年至今：单克隆抗体的鼠源性及分子过大的问题得以解决，可仅作为与抗原特异性结合试剂。 1984年诺贝尔奖 第二节 单克隆抗体 一、单克隆抗体的产生基础：融合细胞的 制备 诱导细胞融合的主要方法 1. 病毒诱导融合 2. 化学融合剂诱导融合 其中最常用的是聚已二醇（PEG） 3. 电融合 病毒诱导融合 脂质体诱导融合 电融合 是指细胞在电场中极化成偶极子，并沿着电力线排列成串，然后用高强度、短时程的电脉冲击穿细胞膜而导致细胞融合。 单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细