高效液相色谱法测定环孢素开题展示 课件.ppt

学生：陆日鸣 指导老师：易林高 合作老师：陈晓孩 高效液相色谱法测定环孢素血药浓度 研究目的及意义 研究具备的条件 研究关键问题及难点 研究背景 实验方案 报告内容 背景① 环抱素A(cydosPorinA，CsA)，是一种高效免疫抑制剂。CsA的问世是现代器官移植的一座新的里程碑，它的临床应用是近20年来器官移植的重大进展。CsA目前为器官移植和骨髓移植术后抗排斥反应的首选药。近几年CsA也应用于再生障碍性贫血、自身免疫系统疾病、银屑病、异位性皮炎、类风湿性关节炎和肾病综合征等系统疾病。 背景② 环孢素A 由11个氨基酸组成的环状多肽，其作用机制为可逆特异地作用于淋巴细胞和抑制淋巴因子合成及释放，阻断淋巴细胞生长周期G0期和G1早期阶段，不抑制红细胞生成，也不影响吞噬细胞功能。CsA在临床上的应用明显降低了移植肾急性排斥反应的发生率，为抗器官和组织移植后排异反应的首选药物。 通过建立HPLC法测环孢素的血药浓度，并对实验相关数据进行研究和分析，为临床安全、合理用药提供参考。 目的 意义 CsA口服吸收不均匀，生物利用度个体差异大，具有高度可变的药动学性质，且受多种药物相互作用，治疗指数较窄，血药浓度与疗效和毒性密切相关，极易发生排斥和中毒反应，因此在临床治疗中进行CsA血药浓度监测并调整其浓度在有效范围内对指导临床合理用药具有重要的临床意义。 研究具备的条件 附三医临床药学室提供上网进行中英文文献的检索，收集所需资料 前期动物实验取得的含CsA血浆样本 实验室提的实验器材及安捷伦高效液相色谱仪 研究的关键问题 问题1：预处理方法和蛋白质沉淀剂的正确选择，会对实验的效果产生很大的影响 问题2：流动相的组分和比例的合理调配，以及压力，柱温，流速等多种因素对实验研究的影响 两个问题 标准溶液配制 血液样品处理 标准曲线绘制 血药浓度测定 √ √ √ √ 精密称取纯度98.8％的CsA 适量，用甲醇配成0.5mg/ml的对照品储备液，置阴凉处保存。临用时用流动相（甲醇：水=87:13）稀释得各种浓度的环胞素A对照品溶液。 ①1ml样品全血+1mlNaOH（0.025mol/L）→混合1min→加入乙醚震荡2min→离心吹干→甲醇1ml混合→HCl1ml；正乙烷3ml→离心5min→弃去正乙烷→加1ml NaOH（0.025mol/L）→乙醚提取→溶解吹干 ②1ml样品全血+0.5ml ZnSO4（0.1mol/l）+0.5mol H2O→混合1min→加入乙醚震荡2min→离心吹干→甲醇1ml混合→HCl1ml；正乙烷3ml→离心5min→弃去正乙烷→加1ml NaOH（0.025mol/L）→乙醚提取→溶解吹干 ③1ml样品血浆+1mlNaOH（0.025mol/L）→混合1min→加入乙醚震荡2min→离心吹干→甲醇1ml混合→HCl1ml；正乙烷3ml→离心5min→弃去正乙烷→加1ml NaOH（0.025mol/L）→乙醚提取→溶解吹干 ④1ml样品血浆+0.5ml ZnSO4（0.1mol/l）+0.5mol H2O→混合1min→加入乙醚震荡2min→离心吹干→甲醇1ml混合→HCl1ml；正乙烷3ml→离心5min→弃去正乙烷→加1ml NaOH（0.025mol/L）→乙醚提取→溶解吹干 精密量取CsA 储备液适量，用流动相配制成50、100、200、400、800、1200、1600、2000ng/mL系列浓度，按色谱条件（流动相为甲醇：水=87:13，流速为1.2ml/min，柱温70℃，检测波长210nm。）进样，记录色谱峰及峰面积。以CsA峰面积(y)对浓度(x)进行回归，得回归方程。 将处理好的样品按色谱条件（流动相为甲醇：水=87:13，流速为1.2ml/min，柱温70℃，检测波长210nm。）进样，记录色谱峰及峰面积。将峰面积代入方程求得血药浓度。 标准溶液配制 血液样品处理 标准曲线绘制 血药浓度测定 √ √ √ √ The End 谢 谢