于咏兰-中国农业大学动物医学院.DOC

中国农业大学 本科生“URP”立项申请书 项目名称 抗体 IgM检测在犬瘟 热病毒(CDV)感染早期诊断中的意义 申 请 人 于咏兰 工作单位 动物医学院 联系电话 电子信箱 yylpurple@126.com 填表日期 2015年4月15日 中国农业大学教务处制 项目名称 抗体IgM检测在犬瘟热病毒(CDV)感染早期诊断中的意义 项目起止时间 2015.5-2016.4 项目申请人情况 姓名 于咏兰 性别 女 出生日期 1970 最后学历与学位 博士／博士 专业技术职务 副教授 从事专业 临床兽医学 项目概况 （一）立项背景 犬瘟热是犬科动物的一种传染性极强，致死率极高、治愈率低的全身性病毒病，近年也引起大熊猫感染。在感染中后期，缺乏有效的治疗方法，因此对其进行早期诊断有重要的临床意义。同时，早期诊断有利于将患病动物及时隔离，避免其它动物感染。 目前临床上最常用的诊断方法是胶体金免疫层析法。由于疾病进程及个体的差异，病毒血症的持续时间各不相同，导致了该方法诊断的不确定性。 对于犬瘟病毒的血清学检测，目前主要进行IgG抗体滴度的测定。然而，无法判断高滴度的IgG其来源是注射疫苗还是病毒感染。由于IgM比IgG产生早，血清中高滴度的特异性犬瘟病毒IgM抗体提示犬瘟的早期或近期感染，血清IgM的测定为诊断犬瘟热提供了一个新思路。 （二）立项依据 血清中IgM抗体是在病毒感染早期出现的，它们的存在提示着近期或当前的病毒增殖，测定CDV IgM抗体滴度具有非常重要的临床意义。 最早利用测定血清中IgM抗体滴度来诊断犬瘟疾病的方法是1986年由Florent建立的，之后Blixenkrone-Moller（1991）、Barben（1999）、Messling（1999）和Griot-Wenk等（2001）人也陆续建立了各自的方法，但是这些分析方法费时，并且难以应用于临床的诊断。因此，一个简单、快速的ELISA 方法对于临床医生在犬瘟疾病早期进行准确的诊断很有必要。 1980年，Noon等人的研究发现，应用CDV全抗原ELISA方法，在犬人工感染野毒后的第七天首次检测到IgM抗体，并于21天左右抗体滴度达到最大值。而在T.Waner等人的研究中，应用dot ELISA kit在病毒感染后第九天首次检测到中等水平的IgM抗体滴度，并于12天后达到最大滴度值。Von Messling等人在1999年的研究中发现，仅仅在首次接种CDV疫苗 2周后产生少量的IgM抗体滴度，并随着疫苗的再次接种而逐渐消失，Griot-Wenk等人（2001）也有类似的发现。 综上，目前该方向的研究对象大多是疫苗接种或人工攻毒的犬，关于自然感染CDV患犬的IgM抗体滴度知之甚少。同时这些研究的样本数量也相对较少，所应用的ELISA方法较复杂，不适合于临床应用。因此，本项目拟应用快速dot ELISA 方法对临床中自然感染CDV的患犬进行IgM抗体滴度的测定，确定其在CDV早期诊断中的初步意义。 参考文献： 1 、 Von Messing, V., Harde, T C, Moennig, V., Rautenberg, R, Nolte, I. Hass, L. (1999) Rapid and sensitive detection of immunoglobulin M (IgM) and IgG antibodies against canine distemper virus by a recombinant nucleocapsid protein-based enzyme-linked immunorsorbent assay. Journal ofClinieal Microbiology 37, 1049-1056 2、 D. Latha,M.Geetha,P.Ramadass,R.B.Narayanan.(2007) Veterinary immunology and immunopathology 119,278-286 （三）立项内容与目标 对于临床上出现发热、咳嗽、眼鼻分泌物增多、呕吐、腹泻、脚垫过度角化或抽搐等神经症状的疑似CDV感染患犬，利用Dot ELISA kit方法检测患犬血清中特异性IgM抗体滴度，并详细记录患犬的品种、性别、年龄、症状、免疫史和病程。同时将IgM抗体效价与临床症状、病原胶体金试纸结果进行对比分析，确立IgM抗体滴度检测的早期诊断的初步意义。 二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办