16_高效液相色谱法.ppt

2.固定相 吸附色谱所用固定相多是一些吸附活性强弱不等的吸附剂，如硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶的优点较多，如线性容量较高，机械性能好，不溶胀，与大多数试样不发生化学反应等，因此，以硅胶用得最多。 在高效液相色谱法中，表面多孔型和全多孔型都可作吸附色谱中的固定相，它们具有填料均匀、粒度小。孔穴浅的优点，能极大地提高柱效。但表面多孔型由于试样容量较小，目前最广泛使用的还是全多孔型微粒填料。 3 流动相 一般把吸附色谱中流动相称作洗脱剂。在吸附色谱中对极性大的试样往往采用极性强的洗脱剂；对极性弱的试样宜用极性弱的洗脱剂。洗脱剂的极性强弱可用溶剂强度参数（ε0）来衡量，ε0越大，表示洗脱剂的极性越强。 下表列出一些常用溶剂在氧化铝吸附剂中的ε0值。在硅胶吸附剂中ε0值的顺序相同，数值可换算（ε0硅胶=0.77×ε0氧化铝）。 液固色谱最适宜分离那些溶解在非极性溶剂中、具有中等相对分子质量且为非离子型的试样。 特别适用于分离异构体。 (四）离子交换色谱法（IEC） 此法是利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法。凡在溶液中能够电离的物质，通常都可用离子交换色谱法进行分离。它不仅适用无机离子混合物的分离，亦可用于有机物的分离，例如氨基酸、核酸、蛋白质等生物大分子。因此，应用范围较广。 1．离子交换原理 离子交换色谱法是利用不同待测离子对固定相亲和力的差别来实现分离的。 其固定相采用离子交换树脂，树脂上分布有固定的带电荷基团和可游离的平衡离子。 阳离子交换： 当待分析物质电离后产生的离子可与树脂上可游离的平衡离子进行可逆交换， 其交换反应通式如下： 一般形式： R一A＋B ＝ R－B＋A 达平衡时，以浓度表示的平衡常数（离子交换反应的选择系数）： 式中[A]r，[B]r 分别代表树脂相中洗脱剂离子（A）和试样离子（B）的浓度，[A]、[B]则代表它们在溶液中的浓度。 离子交换反应的选择性系数表示试样离子B对于A型树脂亲和力的大小：KB/A越大，说明B离子交换能力越大，越易保留而难于洗脱。一般说来，B离子电荷越大，水合离子半径越小，KB/A值就越大。 对于典型的磺酸型阳离子交换树脂， 一价离子的KB/A值按以下顺序： Cs+＞Rb+＞K+＞NH4+＞Na+＞H+＞Li+ 二价离子的顺序为： Ba2+＞Pb2+＞Sr2+＞Ca2+＞Cd2+＞Cu2+，Zn2+＞Mg2+ 对于季铵型强碱阴离子交换树指，各阴离子的选择性顺序为： ClO4-＞I-＞HS04-＞SCN-＞NO2-＞Br-＞CN-＞Cl-＞BrO3-＞OH-＞HCO3-＞H2P04-＞IO3-＞CH3COO－＞F－ 2.固定相  作为固定相的离子交换剂，其基质大致有三大类：合成树脂（聚苯乙烯）、纤维素和硅胶。而离子交换剂又有阳离子和阴离子之分。再根据官能基的离解度大小还有强弱之分（见下表）。 常用的离子交换剂固定相大致可分以下 几种： （l）多孔型离子交换树脂---它主要是聚苯乙烯和二乙烯苯基的交联聚合物，直径约为5～20μm，有微孔型和大孔型之分； （2）薄膜型离子交换树脂 ---它是在直径约为30μm的固体惰性核上，凝聚1～2μm厚的树脂层； （3）表面多孔型离子交换树脂---它是在固体惰性核上，覆盖一层微球硅胶，再在上面涂一层很薄的离子交换树脂； （4）离子交换键合固定相---它是用化学反应将离子交换基团键合到惰性载体表面。它也分为两种类型： 一种是键合薄壳型，其载体是薄壳玻珠。另一种是键合微粒载体型，它的载体是多孔微粒硅胶。后者是一种优良的离子交换固定相，它的优点是机械性能稳定，可使用小粒度固定相和高柱压来实现快速分离。 3．流动相 离子交换色谱法所用流动相大都是一定pH和盐浓度（或离子强度）的缓冲溶液。 通过改变流动相中盐离子的种类、浓度和pH值可控制k值，改变选择性。如果增加盐离子的浓度，则可降低样品离子的竞争吸附能力，从而降低其在固定相上的保留值。 一般，对于阴离子交换树脂来说 阴离子的滞留次序为： 柠檬酸离子＞SO42－＞C2O42-＞I-＞NO3-＞CrO42-＞Br-＞SCN-＞Cl-＞HCOO-＞CH3C00-＞OH-＞F- 所以用柠檬酸离子洗脱要比用氟离子快。 阳离子的滞留次序大为：