ch01_动物细胞培养基本技术.ppt

5.血清的质量标准 血清质量高低取决于两方面因素： 取材对象 取材过程 血清必须严格执 行相应的标准 血清质量的鉴定一般包括以下几个方面 理化性质：如渗透压、pH值、蛋白电泳图谱、蛋白含量、激素水平、内毒素等 微生物检测：包括细菌、真菌、支原体、病毒等。特别是对支原体、病毒的检测 促生长效果：这是血清重要的特性之一，应当以培养的细胞来检测。 好的血清应该是透明清亮，土黄色或棕黄色，无沉淀或极少沉淀，比较粘稠。 6.血清的使用与储存 正确的使用及保存血清，才能使血清发挥应有的作用。（1）使用前处理： 大部分血清在使用前必须灭活处理，即56℃，30分钟。 灭活的目的是去除血清中的补体成分，避免补体对细胞产生毒性作用。 （2）储存条件 血清一般储存于－20℃，同时应避免反复冻融。购买血清后，首先要灭活处理，然后分装成小包装，储存于－20℃，使用前置于4℃融化。（3）使用浓度 使用浓度一般为5－20％（合成培养基），最常用是10％。 过多血清容易使培养中的细胞发生变化。 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 Volume 3 动物细胞工程 动物细胞工程是通过对动物细胞及其组分的分工程序操作，研究生命活动的规律，实现对动物的遗传改造，结合非生物材料的手段，生产用于治疗人类疾病或缺陷的人工器官、组织、细胞及代谢产物或用于深入研究的材料等为主要研究内容的一门学科。 Chapter 1 动物细胞培养技术 本章主要教学内容： 动物细胞培养基本原理 体外细胞培养技术 动物细胞大规模培养 Section 1 动物细胞培养基本原理 一、动物细胞培养的定义 动物细胞培养是指用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下，使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。 体外培养（in vitro culture）： 就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。分为组织培养、细胞培养和器官培养。 体外细胞与体内细胞有何差异？ 体外培养的与体内生长细胞的差异 细胞离体后，失去了体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡的相对稳定环境中，日久天长，易发生如下变化： 分化现象减弱 形态功能趋于单一化或生存一定时间后衰退死亡，或发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系。 如何分化？ 体外培养中细胞的分化 细胞是否表现分化，关键在于是否存在使细胞分化的条件，如Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构，杂交瘤细胞能产生特异的单克隆抗体，这些均属于细胞分化行为。 二、动物细胞培养的发展历程 1907年，美国生物学家Harrison将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，存活数周，并观察到细胞突起的生长过程。 1923年，法国学者卡勒尔设计卡氏培养瓶培养鸡胚的心肌组织成功 1951年，厄利尔开发了供动物细胞体外培养的培养基 动物细胞基因工程：20世纪80年代以后，随着基因工程技术和细胞融合技术的迅速发展，已经能够把特定的外源基因通过PCR 技术扩增几千倍，并可转染到动物细胞内，使其得到高质量的表达。 近年来，已经启用了300升和1000升的培养罐分别用于生产单克隆抗体和灰色脊髓炎疫苗。 此外人体器官的培养为器官移植开辟了一条途径。 二、动物细胞培养的特点 与微生物细胞培养相比，动物细胞培养有哪些特殊之处？ 动物细胞培养与微生物细胞培养相比，主要有以下不同： （1）动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁； （2）动物细胞倍增时间长，生长缓慢，易 受污染； （3）培养过程需氧量少，对机械搅拌或剪 切力敏感； （4）动物细胞间主要以聚集体形式存在； （5）原代细胞一般繁殖50代左右即退化死 亡。 （6）大多数哺乳动物细胞只有附着在固体或半固体的表面才能生长； （7）动物细胞对于营养要求更加苛刻，除氨基酸、维生素、盐类、葡萄糖或半乳糖外，还需要血清； （8）对于培养环境的适应性更差，对环境极其敏感，包括pH 、溶解氧、温度、剪切力等都比微生物有更高的要求，一般需严格监控。 Section 2 体外培养基本技术 一、培养条件 1. 培养器具 培养瓶、培养板、培养管 材料：玻璃、塑料（聚苯乙烯、聚丙烯等）、金属 2