HPLC系统方法开发讲义.ppt

系统方法开发;有关样品组分和性质的重要信息;分离目的;分离目的;样品的性质以及是否要进行预处理;检测方式;检测器;选择一种 HPLC模式;影响 HPLC 分离的反相条件;主要HPLC 方法的特性;离子交换模式 流动相：水相，另以缓冲液控制pH 值 色谱柱: 阳离子或阴离子交换柱 尺寸排阻色谱 流动相：水 相(凝胶过滤) 有机相 (凝胶渗透) 色谱柱: 二醇基（凝胶过滤用） 聚苯乙烯或硅胶（凝胶渗 透用） ;改善分离;开发HPLC方法的分离目的;检查问题;完善方法;开发 HPLC方法的步骤 ;检测器;紫外/可见光检测器;紫外/可见光检测器;朗伯-比尔定律;光谱图; ;二极管阵列检测器;二极管阵列检测器;检验分离参数时可使用光谱图;光谱鉴定;光谱3点比较法;荧光检测器;荧光检测池的设计;衍生化试剂;示差折光检测器;示差折光检测器;糖的色谱图;电导检测器;电导检测器; ;电化学检测器;ECD检测器的原理;儿茶酚胺类物质的色谱图;LCMS大气压离子化;LCMS 的设计;可以分析哪种类型的化合物 ?;农药的分析 ;农药的分析 (质谱图);不同检测器的比较;HPLC反相柱;相互作用力是什么?; 疏水性;反相模式下流动相溶剂的选择;溶剂极性降低对分离的影响 ;固定相的影响;固定相的影响;反相离子对色谱法;离子对试剂 ;离子对色谱分离羧酸;离子对色谱分离含氨基的化合物;离子对 重点考虑;离子对试剂的类型;离子对试剂的浓度;HPLC 的正相柱;相互作用力是什么?; 氢键力;正相模式下流动相的选择;增加溶剂极性; ;离子交换模式;离子交换模式;用WCX柱进行蛋白质分析;尺寸排阻色谱 (SEC);SEC原理 ;流出顺序;GPC / GFC的目的;MW和 RT的关系;校正曲线;实际样品注射;使用GFC 柱进行蛋白质的分离;使用反相模式对分离进行优化;分离效果的改善;完全分离时的分离度 ;峰面积重叠率;峰重叠百分率是分离度和峰面积比的函数;分离度, Rs;容量因子, k’;理论塔板数, N;分离因子 a;选择因子对分离度的贡献;柱效对分离度的贡献;容量因子对分离度的贡献;影响分离度的因素;怎样提高 N- 第一步 -;HETP (或N) 和 流速 ;增加柱子数目 ;4.0 mmID 0.6 mL/min 4.6 mmID 0.8 mL/min 6.0 mmID 1.0 mL/min;降低有机溶剂的比例. 尽量使k’= 1 – 10， 最好使k’= 2 – 10， k’值小于2，分离度不够 k’值大于10，会扩展运行时间 峰加宽 (1) 灵敏度变小 (2) 定量准确性变差 ;甲醇 / 乙腈/ THF 1) 与水易于混和 2) UV 可以透过 3) 低粘度 4) 极性有差异 与甲醇相比，乙腈有以下优点 1) 操作压力更低 2) 洗脱能力稍高 3) 在低波长范围内可以应用 (185-205nm) 选择乙腈更好. 然而, 由于价格因素和ANC的毒性，甲醇仍然是首选 ;溶剂最优化;溶剂最优化;k’和有机溶剂百分率(B%)间的关系;分离度图;怎样改善 a;a 和溶剂类型之间的关系;改变溶剂类型;离子强度和pH;k’和pH之间的关系;流动相pH值对化合物分离的影响;样品pKa值是分子结构的函数 ;调整 pH值的注意点;k’和缓冲液离子强度的关系;离子强度对PTH 衍生物的保留特性的影响;缓冲液 pH值和pKa值之间的关系;有机酸缓冲液的pKa值;pH值校正;pH 值校正(2);pH值校正(3);怎样调整缓冲液的pH值;k’ 和柱温之间的关系;温度对化合物分离度的影响;温度的影响;更换为其他类型的柱子;填充物对分离效果的影响;改为其他类型的填充物;硅胶特性球形和无定型;硅胶性质粒径;硅胶性质有孔和无孔;硅胶性质表面积和碳百分率 ;硅胶性质硅羟基;硅胶性质硅烷偶合试剂;硅胶性质残留硅羟基;硅胶性质 封尾;封尾和未完全封尾的比较;拖尾的解决;NaClO4;硅羟基的应用;硅胶性质残留的重金属;纯硅胶型和不纯硅胶型的比较;Shim-pack VP-ODS;Shim-pack VP-ODS的质量认证;加入其他有机溶剂;摘要- 分离度的改善 -;HPLC 系统; ;梯度洗脱系统;等浓度洗脱模式的优化;梯度洗脱模式的优化;什么情况下选择梯度洗脱?;梯度洗脱中的平均 k’ 值 (K);梯度曲线;平均 k’值 (K) ;等浓度 梯度;梯度分离的改善;K的初始值;开始梯度比(D