微生物基本实验技.ppt

１、稀释倒平板法 分离纯化 所有操作均在无菌条件下进行 2、平板划线分离法 分离纯化 特点：快速、方便。 分区划线（适用于浓度较大的样品） 连续划线（适用于浓度较小的样品） 灼烧 无菌取样技术 “无菌”一般用于取样中，意味着取样过程中，避免操作引起污染。一个无菌样品的采集，应该通过这样一种方式，即：在收集过程中，本身应避免污染，然后放入消毒容器中。 一、取样前的准备工作：准备好无菌的取样工具和取样容器。 二、取样方案： 用于分析的样品要具有代表性； 要保证样品的代表性首先要有一套科学的抽样方案，其次使用正确的抽样技术，并在样品的保存和运输过程中保持样品的原有状态。 无菌取样技术 无菌取样技术 三、抽样方法： 抽样方法对抽样方案的有效执行和保证样品的有效性代表性至关重要。抽样必须遵循无菌操作程序，抽样工具，容器必需清洁、干燥、防漏、广口、灭菌，大小适合盛放检样。抽样全过程中，应采取必要的措施防止食品中固有微生物的数量和生长能力发生变化。常见的抽样方法有： 1、直接食用的小包装食品：尽可能取原包装，直到检验前不要开封，以防污染。 2．统装或大容器包装的液体食品： 　（1）抽样前摇动或用灭菌棒搅拌液体，尽量使其达到均质； （2）抽样时应先将抽样用具浸入液体内略加漂洗，然后再取所需量的样品，装人灭菌盛样容器的量，不应超过其容量的四分之三，以便于检验前将样品摇匀； （3）取完样品后，应用消毒的温度计插入液体内测量食品的温度，并作记录。尽可能不用水银温度计测量，以防温度计破碎后水银污染食品； （4）如为非冷藏易腐食品，应迅速将所抽样品冷却至0-4℃。 无菌取样技术 无菌取样技术 3．统装或大容器包装的固体和固体食品： （1）每份样品应用灭菌抽样器由几个不同部位采取，一起放入一个灭菌容器内； （2）注意不要使样品过度潮湿，以防食品中固有的细菌增殖。 4．统装或大容器包装的冷冻食品： （1）对大块冷冻食品，应从几个不同部位用灭菌工具抽样，使之有充分的代表性。 （2）在将样品送达实验室前，要始终保持样品处于冷冻状态。样品一旦融化，不可使其再冻，保持冷却即可。 无菌取样技术 5．生产过程中的抽样： （1）划分检验批次，应注意同批产品质量的均一性； （2）如用固定在贮液桶或流水作业线上的抽样龙头抽样时，应事先将龙头消毒； （3）当用自动抽样器取不需要冷却的粉状或固定食品时，必须履行相应的管理办法，保证产品的代表性不被人为地破坏。 四、样品的标记、保存和运送： 1．样品的标记 （1）所有盛样容器必须有和样品一致的标记。在标记上应记明产品标志与号码和样品顺序号以及其他需要说明的情况。标记应牢固，具防水性，字迹不会被擦掉或脱色。 （2）当样品需要托运或由非专职抽样人员运送时，必须封识样品容器。 无菌取样技术 无菌取样技术 2.样品的保存和运送 （1）抽样结束后应尽快将样品送往实验室检验。如不能及时运送，冷冻样品应存放在-15℃以下冰箱或冷藏库内；冷却和易腐食品存放在0-4℃冰箱或冷却库内；其他食品可放在常温冷暗处。 （2）运送冷冻和易腐食品应在包装容器内加适量的冷却剂或冷冻剂。保证途中样品不升温或不融化。 （3）如不能由专人携带送样时，也可托运。托运前必须将样品包装好，应能防破损，防冻结或防易腐和 冷冻样品升温或融化。在包装上应注明“防碎”、“易腐”、“冷藏”等字样。 （4）作好样品运送记录，写明运送条件、日期、到达地点及其他需要说明的情况，并由运送人签字。 模拟题 抽样检查中，抽取的样本数越多越好。F 采样时必须注意样品的生产日期、批号、代表性和均匀性。T 检验后的样品必须保留一个月以备复查。T 在微生物的检验采样中，不可加入防腐剂，固定剂等物质。F 采样必须在无菌操作下进行，采样工具在使用之前，应湿热灭菌，也可以干热灭菌，还可以用消毒剂消毒进行处理。F 微生物检验采样后，非冷冻食品需保持在0－5℃中保存。T ICMSF（国际食品微生物标准鉴定委员会）推荐的抽样方案： 1．ICMSF的采样方法 ICMSF方法中包括二级法及三级法两种。二级法只设有n、с及m值，三级法则有n、c、m及M值。 其中n：系指一批产品采样个数。 c：系指该批产品的检样菌数中，超过限量的检样数，即结果超过合格菌数限量的最大允许数。 　　 m：系指合格菌数限量，将可接受与不可接受的数量区别开。 M即附加条件后判定合格的菌数限量。 无菌取样技术 呈现第二次染色的效果红色；称革兰氏阴性菌（红阴G -） 细菌呈现第一次染色的效果紫色，革兰氏阳性菌（紫阳G＋）； 革兰氏染色原理： 第一步：结晶紫使菌体着上紫色 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在