微生物实验基本知识讲义.ppt

培养基的制备、灭菌、接种培养及纯种分离 实验三 一、目的与要求 了解培养基的配制原理，掌握制备培养基的过程。 了解高压蒸汽灭菌操作技术。 了解干热灭菌操作要点。 学习从自然界中分离、培养微生物的方法。 学习制备平板及接种等无菌操作技术。 二、实验原理: 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无机盐类以及生长因素等五大类营养成份。此外还得有适宜的pH值，一定的渗透压（即浓度）以及氧化还原电位等。 灭菌：即通过不同的加热方法，使微生物体内蛋白质凝固变性，从而达到灭菌的目的,蛋白质的凝固变性与蛋白质中含水量的多少有关，含水量较多者，其凝固所需要的温度低，反之，含水份较少者需要高温才能使蛋白质凝固。因此杀灭芽孢比杀灭营养体所需的温度高。 利用目的菌的生理特征，将菌从微生物群体中筛选出来，并进行分离培养，获得纯种。 三、实验方法 1.玻璃器皿的灭菌： 干热灭菌：适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，160~170oC，1~2小时。 2. 培养基的配制 察氏培养基、牛肉膏－蛋白胨培养基 3. 培养基的灭菌 高压蒸汽灭菌 阿尔茨海默症防治相关知识埃及的金字塔有建造方法动画艾司洛尔在神经外科重症中的应用二级二班防溺水等安全教育 实验一：显微镜的使用，微型动物的计数，微生物形 态观察 实验二: 微生物大小的测定，各菌种的观察，油镜的 使用 实验三：培养基的制备、灭菌、接种培养及纯种分离 实验四：微生物的染色方法（革蓝氏染色法） 实验五：纯培养菌种的菌体菌落形态观测，染色菌体 的观察 显微镜的使用，微型动物的计数，微生物形态观察 实验一 熟悉光学显微镜基本结构和用途； 掌握低倍镜、高倍镜使用方法; 掌握使用显微镜观察微生物的形态； 掌握微生物直接计数法中常用的方 法——血球计数法 学习血球计数器的构造、原理及使用方法 一、实验目的 显微镜 玻片标本 酵母菌 载玻片、盖玻片、擦镜纸 血球计数板 待测水样 无菌毛细管，吸水纸 二、实验器材 机械系统部分 光学系统部分 照明系统部分 1.光学显微镜的构造 三、实验内容 （一）光学显微镜的使用 机械部分 调焦器 镜筒 物镜转换器 载物台 推片器与游标卡尺 镜座 镜柱 活动关节 镜臂 光学系统部分 目镜(接目镜) 物镜(接物镜) “5×”，“10×”的含义。目镜指针 低倍镜 (8x，10x)：0.25,160 高倍镜 (40x,45x):0.65,160/0.17 油 镜 (90x,100x):1.25,160/0.17 如何计算显微镜的放大倍数？ 照明系统部分 光 源 反光镜 聚光镜 光 圈 ： 内光源与外光源 ： 凹面镜与平面镜 ： 升高与降低聚光镜 ： 放开与关闭光圈 如何调节观察视野的明暗度？ 2.光学显微镜的使用 取镜 放镜 对光 放片 调焦(粗调焦和细调焦) 低倍镜的使用 高倍镜的使用 问题思考：对颜色深的标本与颜色浅的标本在观察过程中有何不同？ 3.显微镜使用注意事项 显微镜持取正确姿势 使用前后的镜头维护 注意标本的放置方向 观察时注意双目齐睁 高倍镜不得使用粗调 严禁拆卸任何部件 使用后恢复机器原貌 (二)微型动物的计数基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液放在血球计数板与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的，可根据观察到的数目换算成单位体积的总数目，此法计得的是菌的总数，故称总菌计数法。 血球计数板 血球计数板 血球计数板 血球计数板刻有两方格网，每网分九大方格，中间为计数室。计数室为25×16（16×25）小方格。计数时常数五个中格的总数，换算出1ml中的总菌数。 操作步骤 稀释：将水样进行适当稀释，菌液不浓，可不必稀释。 镜检计数室：在计数前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则进行清洗。 加样品：盖上盖玻片，用毛细管将菌液由盖玻片边缘滴一小滴，让其自行渗进计数室。不可有气泡。 　4 显微镜计数：先低倍镜找计数室，后高倍镜计数。一般以每小格5—10个菌体为宜。常选四角和中央五个中格计数。格线上菌体只数上线和左边线。同法计另一室。 　5 清洗血球计数板：自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，自行凉干。镜检，洗净为止。 　６记录 7 计算 计数时，若采用一大方格为25个中方格的血球计器，5个中方格的总菌数设为A，菌液稀释倍数为B，则1mL溶液中的总菌数（个）为： A/5×25×104×B