微生物检验标本采集与接种.ppt

脓液培养-标本要求 临床医生根据需要无菌操作取材，比较理想的方法是用注射器抽取脓性物质。从脓肿底部或脓肿壁的取样，效果最好。如果不能获得抽取物，也可以用拭子从伤口深处采集渗出物，至少采集两个拭子，一个用于涂片染色，一个用于培养。厌氧培养最好不用拭子。 将采集的标本置于无菌试管内，立即送检。 厌氧培养标本取材应迅速、准确，禁止接触空气，盛标本容器内要排尽空气 脓液培养 【标本处理】 标本划线接种于羊血平皿，35℃孵育24～48小时。同时涂片革兰染色。 厌氧培养接种布氏血琼脂，厌氧环境培养。 观察结果，有细菌生长者进行细菌鉴定和药敏。 前列腺培养 【标本要求】 首先用无菌等渗盐水的拭子洗净尿道口。 由临床医生行前列腺按摩术留取标本于无菌试管内，立即送检。 【标本处理】 将标本划线接种于羊血平皿，35℃孵育24～48小时。 观察结果，有细菌生长者进行细菌鉴定和药敏。 【注意事项】 留取标本注意避免污染。 疑为性传播疾病做相应的STD培养。 淋球菌培养 【操作步骤】 待检物划线接种于专用MTM平皿上，将接种好的平皿置烛虹中置35℃温箱孵育48小时； 取出平皿，挑取可疑菌落进行鉴定； 鉴定： 涂片革兰染色； 氧化酶试验；β－内酰胺酶试验；生长试验；糖发酵试验。 支原体培养 从4~10 ℃冰箱中取出所需数量地培养基瓶，恢复液及鉴别、定量、药敏板，使其在接种前接近室温。 旋下外盖，取下丁基橡胶内塞，然后挤滴加入恢复液，培养基迅速融解、表面至标签上缘处（约1.8ml） 应随即、直接往培养基瓶接种标本（如果延迟接种，则标本置室温不超过2小时；在4~10 ℃时不超过8小时） 混匀后，从瓶内分别取50微升（1大滴）加到鉴别、定量、药敏板的每一小孔中 然后，在每孔正中上方，准确、挤滴加入一滴石蜡油。 将鉴别、定量、药敏板置36 ℃孵育箱中培养12小时后，即可开始观察结果;不见阳性者，则连续培养时间应延长至48小时结束。 临床细菌室厌氧菌培养基本程序 厌氧培养基本设备 厌氧标本采集和运送步骤 厌氧菌的分离和鉴定步骤 厌氧菌的报告 厌氧菌的药敏试验 厌氧菌的菌种保存 厌氧培养基本设备 输送琼脂 Amies琼脂 (41998、41999) 难辩梭菌琼脂(43213) 厌氧培养基 厌氧培养装置 厌氧气袋 厌氧盒或厌氧罐 厌氧培养箱 厌氧菌鉴定方法 尿路感染病原菌 大肠埃希菌与膀胱上皮细胞相互作用 伞状粘附 膀胱上皮细胞 尿液运输方法 无需冷藏 有症状妇女的尿路感染诊断性试验 尿液革兰染色-革兰阴性杆菌 传统的尿培养 使用校准过的接种环(0.001 or 0.01 ml) 垂直插入装有尿液的无菌容器中 在琼脂平板上分区划线：血平皿，麦康凯平皿或CLED平皿 大多数尿路病原菌能在血平皿上生长 麦康凯平皿有鉴别功能，为革兰阴性杆菌的选择性培养基 尿培养的划线方式 第一区 = 50,000 cfu/ml 第二区= 75,000 cfu/ml 第三区= 100,000 cfu/ml 沿中心线向下= 50,000 cfu/ml 长向边缘= 100,000 cfu/ml 尿培养的培养基 5%血平皿（美国用羊血，欧洲用马血） 伊红美兰平皿（EMB）大肠埃希菌为金属绿 麦康凯平皿 – LF vs NLF 胱氨酸-乳糖-低电解质平皿（CLED） 显色平皿(BBL公司的CHROMagar ，Hardy BluEcoli Biplate) CUTI（Oxoid公司）; CPSID2（生物梅里埃公司）; UriSelect （Biorad公司）; Rambach; others 蛋白胨，酵母提取物，色原物 科玛嘉显色培养基（BBL） 大肠埃希菌 肠球菌 无乳链球菌 腐生葡萄球菌 同样的接种物在科玛嘉显色培养基（BBL）上生长 大肠埃希菌，肠球菌和变形杆菌在血平皿上生长 CHROMagar? Orientation (BBL) chromID CPS- 生物梅里埃公司的产品快速鉴定大肠埃希菌，变形杆菌和肠球菌 可分离所有尿道病原菌 更好的可操作性 更好的鉴定能力 更高的可靠性 尿培养 【操作步骤】 1．培养皿放置至室温，先充分摇匀尿液 2．用1μl定量接种环或用微量移液器无菌吸取10ul尿液接种于羊血平皿和MAC上，然后用无菌接种环划线涂布，置35℃，最好在5～10％co2环境下，孵育18～24小时 3．次日观察结果，根据诊断标准进行诊断，阳性结果做细菌鉴定和药敏。 尿培养 【定量标准】 用1μl接种环，结果×1000cfu/ml；用10μl接种环，结果×100cfu/ml。 菌计≥10万cfu/ml，继续鉴定和药敏。 降低标准的情况： 幼儿、儿童或男性的确定的尿路感染，其尿标本定量也可＜10万cfu/ml； 插导