梅毒感染现状与实验室诊断.ppt

试验特点 原理和成分与试验相同 血清不需要灭活 不需要显微镜观测结果 可作定量试验 有现成的试剂盒携带方便 操作简单 价格便宜 RPR/TRUST检测流程 试验前期准备 RPR仪(水平旋转仪器) 必须滴！！ 试剂 50μl移液器、吸头 记号笔、废物缸 工作服 一次性手套、口罩、帽子 生物安全柜 梅毒自动旋转仪 检测流程 操作步骤： 将检测试剂盒从冰箱中取出，室温放置30分钟。 测RPR自动旋转仪转速。 在RPR纸卡上编上相应的待检样本的编号。 测速:100转/MIN （±2转） 测旋转幅度:19mm 检测流程（定性） 加样： 吸取50μl血清（浆）放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内。 加抗原： 将抗原轻轻摇匀，用试剂盒提供的针头加1滴抗原。 反应： 将卡片置梅毒自动旋转仪8分钟立即在亮光下观察结果。 检测流程（定量） 稀释液准备： 在圈内加入50μl生理盐水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。 加样： 吸取50μl血清(浆)与各圈中盐水作系列稀释，并涂布满整个圈内。 重复定性试验后两步。 临床意义 早期梅毒（一期、二期）经足量规则抗梅毒治疗后3个月，VDRL试验抗体滴度下降2个稀释度，6个月下降4个稀释度。 一期梅毒1年后转为阴性 二期梅毒2年后转为阴性。 晚期梅毒治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。 临床意义 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。 【感染5～7周（或硬下疳出现后2～3周）】 经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。 假阳性问题 假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性 ①技术性假阳性 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。 ②生物学假阳性 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 急性生物学假阳性反应的疾病 风疹 水痘 传染性单核细胞增多症 传染性肝炎 上呼吸道感染 肺炎球菌性肺炎 病毒性肺炎 牛痘疹 慢性生物学假阳性反应的疾病 系统性红斑狼疮 自身免疫性溶血性贫血 盘状红斑狼疮 结节性多动脉炎 类风湿性关节炎 桥本氏甲状腺炎 风湿性心脏病 干燥综合征 毒品瘾者 慢性肾炎 肝硬化 老年 麻风 (是唯一产生慢性生物学假阳性的感染性 疾病) 妊娠的假阳性反应 这是一种生理情况下的生物学假阳性 假阳性发生率较低有报告为0.4%，滴度低。 假阳性问题 梅毒假阳性反应的处理 技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。 对急性生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。 前带现象 原理 指二期梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果。 处理 将血清稀释后再进行试验。 血清固定 耐血清性（血清固定） 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。 梅毒螺旋体抗原血清学试验 试验原理 检测血中特异性抗梅毒螺旋体特异蛋白为抗原的抗体（ IgG 和IgM ）。 特异性IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出。 Q3：梅毒螺旋体抗原血清学试验的定量试验在梅毒诊疗中有意义吗？ 实验方法 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA） 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT) 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 化学发光免疫分析法（CLIA） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB） TPPA/TPHA TPPA试验原理与TPHA试验基本相同 TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒 TPHA试验中梅毒螺旋体致敏羊红细胞 特点 梅毒螺旋体全抗原 TPPA原理示意图 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS） 原理 将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。 曾经认为FTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。 TP-ELISA 原理 用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。 特点 本法可用于大规模血清检测。 免疫