利用Fossomatic7DC确定体细胞分型计数——创新-FossAnalytical.PDF

利用 Fossomatic 7 DC 确定 体细胞分型计数——创新参数 作者：Daniel Schwarz 博士，丹麦福斯公司牛病专家 Dedicated Analytical Solutions 体细胞计数(SCC)表示牛奶中的细胞总数量，是全世界范围内用来检测和管理奶牛群乳 腺炎的重要指标。尽管奶牛的乳房健康情况在过去 40 年里已经有了显著改善（例如 Sampimon et al., 2005），但乳腺炎仍然给乳品业造成巨大经济损失（例如 Seegers et al., 2003）。困难在于乳腺炎是一种非常复杂的疾病，受多种因素的影响，例如环 境和奶牛饲养。另外，乳腺炎的病原体不断进化，这就需要改变乳腺炎管理方案。此 外，奶牛也在发生变化，产奶量明显增多，这就需要采取不同类型的奶牛管理方法。 考虑到牛奶中体细胞主要包含淋巴细胞、巨噬细胞和多形核中性白细胞(PMN) ，研究 人员发现除了确定总的体细胞数以外，细胞的分型有利于更准确地体现奶牛乳房的 实际健康状况（Pillai et al. ，2001 ；Rivas et al. ，2001 ；Pilla et al. ，2013）。牛奶中 的这三种主要细胞群对奶牛乳腺中的炎症反应起到重要作用（Sordillo et al. ，1997； Oviedo-Boyso et al. ，2007）。简单来说，淋巴细胞负责调节感应和抑制免疫应答。巨 噬细胞能识别侵入的乳腺炎病原体，通过产生大量PMN ，发起免疫应答。此外，巨噬 细胞能吞噬细菌、细胞碎屑和积累的牛乳成分，并执行组织修复。PMN 细胞在乳腺炎 初期负责抵御入侵的细菌。 乳腺炎期间，总的体细胞计数以及细胞的组成都会明显变化。在健康乳腺产出的牛奶 中，体细胞计数较低，其中主要包含巨噬细胞和淋巴细胞（Lee et al. ，1980；Schwarz et al. ，2011a, b ；Pilla et al. ，2012）。发生感染时，体细胞计数会显著增加，而且 PMN 成为占多数的牛奶体细胞（Paape et al., 2002）。 福斯新技术的关键要素 福斯已研发一种获得了专利的必威体育精装版方法，用以同时确定体细胞计数和新参数——体细 胞数分型计数(DSCC)。全新 Fossomatic 7 DC 可确定这两种参数，测量能力可达每小 时 600 个样品。因此，当前 Fossomatic 型号的基本测量原理得到了再设计和扩展。 所以, 用来测量 SCC 和 DSCC 的新型 Fossomatic 仪器的关键要素是：全新化学过程， 全新培育装置，以及全新测量模块。 全新化学过程基于荧光染料吖啶橙（Fossomatic DC 染料）。牛奶细胞的特性在文献 中已有详细介绍（例如 Lee et al., 1980 ），并在添加吖啶橙时利用这些特性，因为细 胞核以及细胞区室都要染色。 为设备增加全新培育装置，以确保利用 Fossomatic DC 试剂对细胞进行恰当的和标准 化培育。每个样品需严格在 40 ℃的培育装置内停留一分钟。 全新测量模块是 Fossomatic 7 DC 的核心。使用耐久的 LED 激光作为光源，利用三个 检测器,接收通过激光的每个细胞的荧光和形态信息。在两个荧光通道，即 FL1 和 FL2 中测量荧光信号。用侧向散射(SSC)检测器捕捉每个细胞的形态特性，尤其是粒度。 第 2 页 上述关键要素结合，使 Fossomatic 7 DC 能同时测量 SCC 和 DSCC ，过程如下：分析固 定体积的牛奶样品，以计算每毫升牛奶的细胞数量。在 FL1 vs. FL2 点阵图（图 1 A ）中 识别体细胞，并与牛奶背景（例如细菌、脂肪球等）分开。此外，在背景中使用 SSC 信息以更准确地确定 SCC 。在采用不同比例的第二个 FL1 vs. FL2 点阵图中,进一步研 Dedicated Analytical Solutions THE FOSS DSCC METHOD 究图 1 A 中识别的体细胞，以将巨噬细胞与淋巴细胞和 PMN 组进行区分（图 1 B ）。 DSCC 参数表示淋巴细胞和 PMN 组的百分比。巨噬细胞的百分比是 100 – DSCC 。 A.