大学生创新训练计划项目项目研究成果概述项目名称高效降解果蔬.DOCVIP

大学生创新训练计划项目 项目研究成果概述 项目名称 高效降解果蔬农药的变色栓菌漆酶基因的克隆及表达 项目类型 校级项目 立项时间 2012.07 项目负责人 100204319 薛秋霞 项目团队成员 潘昱蓉 高雯飞 宋武琼 李琦 所在学院 化工学院 指导教师 赵林果、裴建军 一、项目研究内容简介 （1） 栓菌漆酶基因的克隆 以变色栓菌为出发菌株，克隆出漆酶基因。 （2） 转化子的筛选 使用带有抗性标记的载体，结合电转化技术，根据zeocin抗性水平等筛选高拷贝重组子。利用MAC平板，筛选出具有漆酶酶活的转化子。 （3） 栓菌漆酶基因的异源表达 表达载体的构建--表达的大量提取--表达载体的线性化--毕赤酵母的转化--重组毕赤酵母的筛选和鉴定--重组酵母的产酶历程。 （4）重组漆酶降解农药的适宜条件研究 二、项目研究成果 1、项目成果介绍，200字左右，重点展示作品实物（照片）、实验效果图（表）、作品效果图等。 本项目最终获得变色栓菌获得漆酶工程菌株漆酶活力比本2-5倍，从而能够大大降低该酶的制备成本和使用成本 图1 重组变色栓菌漆酶蛋白SDS M: marker; 1: lacA; 2: lacB; 3: lacC 图2 MM+ABTS+Cu2+平板上显色圈 图3重组变色栓菌漆酶在不同毕赤酵母中的表达比较 图4温度对漆酶LacA稳定性的影响 表1金属离子对重组漆酶的影响 Metal ions Relative activity (%) LacA LacB LacC 对照 100 100 100 EDTA 95.2 93.6 93.9 Al3+ 120.6 126.9 133.3 Cu2+ 104.1 113.4 107.1 Zn2+ 67.1 66 63.6 Ca2+ 67.5 62.3 67.7 Fe2+ 3.4 1.4 0 Fe3+ 54.8 43.2 44.7 Na+ 78.8 80.1 78.6 K+ 83.6 71.6 76.8 Li+ 87.7 84.4 76.8 Mg2+ 66.4 60.3 62.9 NH4+ 96.6 93.5 98 Mn2+ 62.3 60.3 62.6 Ba2+ 72.6 73 65.7 Hg2+ 91.7 98.4 94.5 2、发表论文情况 论文题目 论文作者 稿件状态 刊物名称 发表时间 学生是第几作者 　Optimization of Fermentation Conditions for Laccase Production by Recombinant Pichia pastoris GS115-LCCA Using Response Surface Methodology and Its Application to Dye Decolorization Li Qi, Xie Jingcong, Zhao Linguo, Xue Qiuxia, Pei Jianjun 发表 Bioresources 2013.06 四作 3、申请专利情况 专利题名 专利申请者 申请专利号及时间 授权专利号及时间 学生是第几权利人 　无 　 　 　 　 4、参加竞赛获奖情况 竞赛名称 竞赛级别 竞赛主办单位 获奖学生名单 （学号、姓名） 获奖等级 获奖时间 　无