绝无共价键1概念蛋白质分子由两条或两条以上肽链组成.PPT

四 蛋白质的四级结构 (quaternary structure) 二、 蛋白质的分离纯化 (四) 层析 层析种类： 凝胶过（分子筛） 离子交换层析（阴离子和阳离子） 亲和层析 四、蛋白质空间结构的测定 分类：根据支持物的不同，电泳电泳可分为： 薄膜电泳、凝胶电泳……　 （二）电 泳 概念：带电颗粒在电场中向着所带电荷相反 方向移动称为电泳。 原理:不同的蛋白质的因结构、形状和带电 量的不同而有不同的泳动速度，从而 达到分析和分离蛋白质的目的 应用：电泳技术是生化常用分析技术之一 利用压力或离心力强行使水和小分子杂质通过超滤膜(一种半透膜)除去，而蛋白质留在膜上，称为超过滤 将蛋白质溶液放在半透膜的袋内，置于流动的适当的缓冲液（如纯水）中，小分子杂质（如硫酸铵、氧化钠等）从袋中透出，而蛋白质保留于袋中从而将蛋白质纯化，这种方法称为透析 （三）透析 透析工作图 半透膜原理 带正电荷多蛋白紧密结合 带负电荷多蛋白流过层析柱 阳离子交换树脂工作示意图 分子筛层析 亲和层析工作示意图 蛋白质 载体介质 配体 结合 洗脱 洗脱介质 (六)超速离心 三、多肽链中氨基酸的顺序分析 第一步： 分离提纯蛋白质 ，测定NH2末端的数目，确定蛋白质分子是 由几条肽链构成的，并分离出 每条肽链。测定肽链的分子量,计算组成该肽链的氨基酸残基数。及每种aa的百分组成。 一般过程： 肽链分子中氨基酸残基数=肽链的分子量÷120 　　（各种的氨基酸残基的平均分子量为120） 再将肽链彻底水解，用离子交换层析法将各种的氨基酸分离 * 是指亚基间的空间排布、亚基间相互作用与接触部位的布局，不包括亚基本身的空间结构。亚基间以次级键相连，绝无共价键 1.概念 蛋白质分子由两条或两条以上肽链组成，每条肽链各自形成了独立的三级结构，分子中的每一个具有独立三级结构肽链,称为亚基 亚基(subunit) 2.维持蛋白质四级结构的作用力 主要是疏水作用 次级键 盐键、氢键 第三节 蛋白质结构与功能的关系 （一） 一级结构是空间构象的基础 一、蛋白质一级结构与功能的关系 以124个氨基酸残基组成的牛胰核糖核酸酶（4对二硫键）为例说明 牛胰核糖核酸酶的变性与复性 β-巯基乙醇 尿素或盐酸胍 透析 有活性 无活性 1.一级结构相似的蛋白质功能相似 一级结构不同的蛋白质功能不同 胰岛素的一级结构及种属差异 （二）一级结构与功能的关系 ACTH 促肾上腺素皮质激素 MSH 促黑激素 一级结构不同的蛋白质功能不同 HbS与HbA的区别 Β-亚基第6位氨基酸 正常人：Glu 患者：Val 由4个亚基组成 血红蛋白 功能:运输O2 二、蛋白质空间结构与功能的关系 （一）肌红蛋白Mb与血红蛋白Hb 蛋白质的空间结构决定生物学功能 肌红蛋白（1个亚基）与血红蛋白（4个亚基）且一级结构有较大差异，但均具有与氧可逆地结合的能力 其结构特点是，都与血红素（辅基）共价结合 O2 O2 （二）血红蛋白构象变化与结合氧的能力 变构效应 蛋白质分子与它的配体结合后构象发生变化, 其功能也随之变化的现象,称为变构效应 协同效应 蛋白质分子中的1个亚基与其的配体结合后, 能影响其它亚基与配体的结合,称为协同效应 促进 正协同效应 抑制 负协同效应 血红蛋白与氧结合的正协同效应 氧饱和度 静脉血 动脉血 氧分压 P50 100% - Hb Mb 第四节 蛋白质的理化性质 一 、蛋白质的理化性质 （一）两性解离和等电点 蛋白质是两性电解质。在溶液中的带电状况主要取决于溶液的pH值 Pr COOH NH3+ Pr COO- NH3+ Pr COO- NH2 +OH- +H+ +OH- +H+ pH=pI pHpI pHpI 此时溶液的pH值称为蛋白质的等电点(pI) 等电点（pI）：在某一pH值溶液中， 蛋白质酸性基团和碱性基团的解离程度相当 蛋白质分子所带正负电荷相等，净电荷为零 蛋白质分子颗粒大小1-100nm之间,属胶体颗粒范围，在溶液中能形成稳定的胶体 蛋白质的胶体原因： 表面形成水化层 表面同种电荷的斥力 （二）蛋白质的胶体性质 蛋白质的聚沉 （三）蛋白质的变性、沉淀与凝固 变性后的蛋白称为变性蛋白质 1. 蛋白质的变性作用 在某些理化因素作用下.蛋白质的构象被破坏，失去其原有的性质和生物活性，称为蛋白质的变性作用(denaturation) 概念: 常见的变性因素： 强酸、 强碱、 有机溶剂、 尿素、 胍、 重金属 生物碱、 化学因素 物理因素 剧烈振荡 热、 紫外线、 超声波、 变性蛋白质的主要特征: （2） 生物活性丧失 （4） 变性蛋白质容易消化 （1）蛋白质分子中的次级键断裂,构象破坏，