食品安全检验技术微生物检验模块志贺氏菌的检验.ppt

闽北职业技术学院食品与生物工程系 志贺氏菌检验 食品安全检验技术（微生物部分） （一）形态与染色 革兰氏阴性短杆菌、无荚膜，无芽胞，无鞭毛，有菌毛。 2~3um×0.5~0.7um 一、生物学特性 （二）培养特性 1、需氧或兼氧性厌氧，最适温度37℃，PH7.2~7.4 2、在普通琼脂和SS平板上，能形成圆形、微凸、光滑湿润、无色半透明、边缘整齐、在中等大小的菌落 3、宋氏志贺氏菌菌落较大，较不透明，粗糙而扁平，在SS平板上可迟发酵乳糖，菌落呈玫瑰红色。 4、在肉汤中呈均匀混浊生长，无菌膜。 （三）生化反应 1、发酵葡萄糖，产酸不产气，除宋氏志贺氏菌外，均不发酵乳糖。 2、不发酵侧金盏花醇、肌醇、水杨苷。 3、不产生H2S，不分解尿素，V-P试验阴性，不能利用柠檬酸盐。 4、甲基红阳性。 二、志贺氏菌的致病性与食物中毒 （一）传染源 食物、病人、粪便、苍蝇等 （二）志贺氏菌的致病性 致病因素： 侵袭力、菌体内毒素、外毒素。 临床症状： A、急性细菌性痢疾： 急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢。 B、慢性细菌性痢疾： 慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型。 GB/T4789.5-2003中志贺氏菌检验程序 三、志贺氏菌的检验 （一）实验内容 样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→生化学试验→→结果报告 第一天 样品处理和增菌培养 1个 500ml广口瓶 1支 250ml量筒 不锈钢汤匙1把 ，玻璃珠，杜氏小管 6套 直径为90mm平皿 1支 10ml移液管 13支 13×100mm试管 6支 18×180mm试管 1、样品处理 无菌操作称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min。 2、增菌培养 放于36℃培养6～8h。 培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 数量 规格名称 下午 上午 准备并灭菌的器材 第二天 接种选择性平板进行分离培养 （一）接种选择性平板 取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和EMB（伊红美蓝）琼脂平板各1个。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发 酵乳糖的菌落。 HE平板原理及反应 发酵乳糖的肠杆菌 不发酵乳糖的某种肠道菌，而且产生硫化氢，可能是沙门氏菌 不发酵乳糖，菌落呈蓝绿色或蓝色可能就是志贺氏菌 SS平板原理及反应 SS Agar (Salmonella Shigella Agar) 大肠杆菌或者别的发酵乳糖的肠杆菌。 是沙门氏菌。有黑色中心。 如果没有黑色中心，就很可能是志贺氏菌了。 麦康凯琼脂平板 菌落为粉红色，半透明的， 可能为志贺氏菌。 EMB平板照片及原理 菌落为无色半透明状， 可能为志贺氏菌。 大肠杆菌 第三天 初步生化试验 （一）接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体培养基 从HE或SS、麦康凯或EMB琼脂平板、挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏。经36℃培养18～24h，分别观察结果。 （二）培养 放于36℃培养18～24h。 结果：乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力。 志贺氏菌在TSI生长的结果（现象）： （1）斜面产碱仍为红色或粉红色； （2）底层产酸不产气，变黄色； （3）不产H2S，不出现黑色。 志贺氏菌在葡萄糖半固体培养基生长：沿线生长，无动力。 三糖铁（TSI）琼脂试验的原理 2－志贺氏菌　3－沙门氏菌　4－大肠杆菌 葡萄糖半固体原理及结果 1. 铜绿假单胞菌2. 志贺氏菌 3. 枯草芽孢杆菌 在志贺氏菌检验中可弃去的培养物： （1）在TSI表面上呈现蔓延生长的培养物 （2）在18~24h发酵乳糖、蔗糖的培养物 （3）不分解葡萄糖，只在半固体培养基表面生长的培养物。 （4）产气的培养物 （5）有动力的培养物 （6）产H2S的培养物 第四天 进一步的生化试验 凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做进一步的生化试验和生化分型实验。 （一）进一步生化试验 即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨苷和七叶苷的分解， 36℃培养。 志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。 （二）生化分群试验 接种