核酸的定量测定定磷法.pdf

实验十 激活剂与抑制剂 对酶促反应的影响 Exp.10 Effects of Activator and Inhibitor on the Enzyme-catalyzed Reaction 实验十一 维生素C的定量测定 Exp. 11 Quantitative Determination of Vitamin C 一、实验原理 唾液淀粉酶可催化淀粉逐步水解，生成分子大小不同 的糊精及最后水解成麦芽糖。淀粉及糊精遇碘各呈不同的 颜色反应。直链淀粉(即可溶性淀粉)遇碘呈蓝色，糊精按 分子的大小遇碘可呈蓝色、紫色，褐色和红色。最小的糊 精和麦芽糖遇碘不显色。根据颜色反应，可以了解淀粉被 水解的程度。 有些物质可作为激活剂，能提高酶活性，有些物质可 作为抑制剂，能降低酶活性，也能影响淀粉被水解的程度 因此，通过与碘产生的颜色反应判断淀粉被水解的程度， 了解激活剂和抑制剂对酶促作用的影响。 二、实验用品 1、材料 唾液(进食前的)稀释100~400倍. 2、试剂 （1）0.1 ％淀粉溶液： 取可溶性淀粉1克，先用少量的水 调成糊状，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加变搅，最后 以沸蒸馏水稀释至100ml 。 （2 ）1％NaCl溶液：1gNaCl 溶于100ml蒸馏水。 （3 ）0.1％CuSO 溶液：1g CuSO 溶于100ml蒸馏水。 4 4 （4 ）碘化钾-碘溶液: 三方法与步骤 取3支试管,按下表操作 表1.酶的激活剂抑制剂实验 试剂 管号 1 2 3 1％NaCl/ml 1 0.1 ％CuSO /ml 1 4 蒸馏水/ml 1 0.1 ％淀粉溶液/ml 3 3 3 稀释唾液/ml 1 1 1 37 ℃ 15 min 冷却 碘化钾-碘溶液/滴 1 1 1 现象 四、实验结果 比较各管现象，解释现象。 五、思考题 1.本实验中1、2、3管各有何用意? 2.结合激活剂和抑制性实验，对酶的激活剂抑制剂进行深 入探讨。 六、参考文献 1. 生物化学实验原理和方法,李建武等编,北京大学出版 社1994年 2.生物化学实验,陈钧辉等编,3版或4版科学出版社2003 ●坏血病，是几百年前就知道的疾病，但是以前人类对它发生 的原因不了解，当时被称作不治之症，且死亡率很高。直 到1911年，人类才确定它是因为缺乏维生素C而产生的。 ●在1928年，从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质，证明对治 疗和预防坏血病有特殊功效，因此称为抗坏血酸 。 ●维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，如果人类（包 括猿猴及豚鼠）的食物中缺乏维生素C，将会导致坏血病， 因此又称为抗坏血酸。维生素C在自然界分布广泛，植物的 绿色部分及许多水果（如橙子、橘子、苹果、草莓、山楂 、鲜枣、猕猴桃等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿、豆 芽菜、辣椒等）中维生素C的含量尤为丰富。 抗坏血酸的定量测定方法很多 一、滴定法 （利用氧化还原反应） 1、2,6–二氯酚靛酚滴定法 2、碘滴定法 二、分光光度法 1、