肿瘤超早期筛查在体检中的实际应用10.6.ppt

血浆突变检测技术 - preMiD 挑战 血浆游离DNA含量极低 突变DNA占比低于0.1% 血浆成分复杂 某些屏障存在 ……………… 应对 preMiD检测基于PCR，扩增DNA 融合Blocker、偏向扩增及熔点分析，极大提高灵敏度 纳米技术提高核酸萃取效率 新技术平台的融入 preMiD? = Blocker + ASA + MCA 突变偏向扩增系统（ASA） PCR引物的3端位必须和突变扩增子匹配，而野生不匹配 采用特异探针，实时PCR反应 熔解曲线分析（Melting Curve Analysis） 荧光vs温度作图得到DNA熔解曲线 DNA溶解曲线是DNA序列的“指纹” 核酸blocker阻滞野 生扩增 设计野生匹配blocker（含PNA修饰） 阻滞对野生片段扩增 三种已有技术的有机结合成preMiD，灵敏度达到0.01%，特异性近100%。 美国斯坦福癌症研究院近30年调查研究发现： 癌前阶段，癌症是可逆性“工程”。 消除突变，抑制癌变 正常DNA DNA突变 （肿瘤驱动基因） DNA修复 抑癌基因诱导凋亡 免疫监视 失败 癌 干预 （突变逆转） 早发现与早预防 突变筛查 免疫力 远离致癌物 干预 突变定量分析 1.对于有基因突变的受检者，同时加做突变定量值，便于后期干预有效性的对比； 2.随着样本量的增加，跟踪后续发展变化，将给出突变风险提示。 突变值 QRAM-qPCR相对定量检测肿瘤特异突变位点在血浆中含量在干预前后的变化，判断效果。 干预有效性判断 主要用途： 1. 直观反应干预或治疗方案的有效性，避免无效治疗。 2.评估手术后患者基本状态，如体内有无残留或转移。 3.判断有无复发。 preMiD专业性 preMiD? 德国标准生产质控体系 国际公认检测内容 COSMIC数据库，包含突变基因及位点信息，属于国际最权威机构必威体育精装版研究成果。 国家批准专有检测试剂 美国Roche检测仪器 注册号: (进)字 2009 第3402689号 preMiD?血浆突变技术验证：NSCLC组织和血浆中EGFR突变一致性研究 试验单位： 北京协和医院、浙江大学附属第一医院、江苏省肿瘤医院、青岛大学附属医院 Sanger测序1212例非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR突变； preMiD?法检测对应1212例血浆EGFR突变。 总体结果： 阳性符合率为80.49%，阴性符合率为94.66%，总符合率为90.35% （唯一完成临床试验研究，血浆-组织突变一致性最高的结果） （已完成CFDA批准临床实验，2011年12月28号-2013年12月28号） 中国唯一入选国际肿瘤学术大会ASCO会议的主讲报告 中国医师协会preMiD项目专家论证会 ctDNA 在国际上的应用 NDRG4, BMP3 NDRG4, BMP3, KRAS 总灵敏度：92% sensitivity 早期肠癌灵敏度：94% 特异性：87% ColonGuard （EXACT） ColonVantage (QUEST) ColoVantage 检测血浆中SEPTIN9的甲基化状态，达到检测和预警结直肠癌的目的。 ColoVantage 是一种无创的检测方法 灵敏度达到70% 特异性达到89% 适用于各个分期的结直肠癌 ctDNA在甲状腺癌检测中的应用 基因检测对甲状腺肿瘤诊断的准确率在80%以上 突变检测能够应对病理检测不能确定的情况 Nikiforov YE et al, J Clin Endocrinol Metab. 2011 Nov;96(11):3390-7 案例分享 preMiD检测：FLT3突变 案例一： FLT3基因突变，2年半后诊断大肠癌中晚期 个人不相信，不愿面对， 没有采取必要干预措施 案例二： KRAS突变 检测者：男性，35岁，重庆人 家族史：其父患肺癌 进行preMiD检测：KRAS基因突变 KRAS突变 报告解读： 结合健康问卷及专家咨询 其父患肺癌 作息紊乱 干咳、胸闷 近期没有体检资料 结合该情况给出建议： 进行胸部增强CT检查， 判断突变在哪个阶段 （临床前期或临床阶段） KRAS突变 2014年5月8日 右肺下叶斜裂旁小结节影 肝左叶多发小囊肿 KRAS突变 — 干预方案 匹多莫德口服液 服用方法： 1支（10ml）/次，2次/日（早晚空腹服用） 3个月为一周期 KRAS突变- - 跟踪随访 2014年9月9日 胸部CT增强未发现肿瘤 干预后4个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果，基因仍有突变，并对再次突变情况进行与第一次的定量值分析，突变较之前下降。 KRAS突变- -复查及定量 案例三： THR-α基因突