精品PPT体外实验.ppt

Balb/c小鼠8周龄 动科部购买240只 分为40组，每组6只 每只小鼠提取的淋巴细胞以2×107个/ml铺于六孔板中，共2ml，适应性培养2小时后加细菌刺激 galectin9的加入：细胞铺于六孔板上即加入，2小时后再加细菌刺激 到时间点后，每孔细胞离心，上清收集行ELISA（IL-4、IL-10、IL-12、IFN-g），细胞分两部分，一部分提蛋白行WB（TLR4、MyD88），另一部分行FC（Tim-3检测） 每孔细胞离心后重悬于2mlPBS，取100ul悬液分入2个EP管内，每管50ul（细胞数约1×106个），每管加PBS至100ul，加入CD3、CD4、Tim-3三种荧光抗体→离心→重悬于300ulPBS中→送检流式 细胞保存：细胞入1ml70%酒精4℃保存，第二天再行流式检测 Balb/c小鼠 淋巴细胞提取液、1640培养液、胎牛血清、IL-2、ConA Galectin-9 PE-抗鼠Tim-3及同型对照 FITC-抗鼠CD3 PerCP-抗鼠CD4 体外实验小鼠不需要清洁级？ 小鼠越重越好，可多提淋巴细胞？不需要区别雌雄，可将所有细胞混在一起再平均分配？ 细胞同时做WB和FC，会不够吗？ 细胞保存方法可行吗？ 抗体是以上四种吗？如何设门？ 体外研究 实验动物 技术路线 淋巴细胞 未处理 galectin9 1:0 1:100 1:200 1:300 Hp 刺激 3 6 12 24 48 实验方法 流式细胞术 材料及试剂 以CD3和CD4设门，测Tim-3阳性细胞百分比 问题 * *