大肠杆菌DPS表达体外自组装及抗氧化作用研究.PDF

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 11 :202-206 大肠杆菌 DPS 表达、体外自组装及抗氧化作用研究 刘文  贾义华  方丽  刘长爱  陈浩  路凯敏  胡巍 （山东理工大学生命科学学院，淄博 255049） 摘 要 ： DNA 结合蛋白 （DNA- binding proteins from starved cells，DPS） 是细菌一类重要的抗逆境保护蛋白。对大肠杆菌 DPS 蛋白进行原核表达和纯化旨为研究其体外自组装和抗氧化活性。构建表达载体pBVDPSHis，诱导表达并纯化DPS 单体蛋白， 通过非变性PAGE 检测DPS 单体自组装情况，通过质粒在Fenton 反应时的降解情况检测DPS 对DNA 的抗氧化保护作用。结果表明， PCR 扩增得到522 bp 的特异性基因片段，成功构建表达载体pBVDPSHis，诱导表达了分子量为 19.5 kD 的DPS 单体蛋白，亲和层 析法纯化的单体DPS 经非变性PAGE 电泳证实以多聚体蛋白形式存在，Fenton 反应说明DPS 具有保护质粒DNA 抗氧化损伤作用。 原核表达的DPS 在体外可以自组装成多聚体结构具有抗氧化保护DNA 作用。 关键词 ： 大肠杆菌；DPS 蛋白 ；原核表达 ；自组装；抗氧化 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.11.026 - ， Expression Self assembly and Antioxidation of Escherichia coli DPS Liu Wen Jia Yihua Fang Li Liu Changai Chen Hao Lu Kaimin Hu Wei （School of Life Sciences ，Shandong University of Technology ，Zibo 255049 ） Abstract: DNA-binding protein from starved cells（DPS）is a key protective proteins in bacterial growth under stress environment. DPS was expressed in prokaryotic cells and purified so as to study its self-assembly activity . The gene was amplified by polymerase chain in vitro dps reaction with specific primers that was inserted by his tag at 3 end and the template was genome from Escherichia coli strain 0111. After digested together with EcoR I and BamH I restrict enzymes, the dps and pBV220 were linked in order to construct pBVDPSHis expression vector. DPS expressed in E. coli by temperature induction was