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超临界流体色谱在生物工程中应用的新进展-生物分子高效分离与表征
维普资讯
第 2l卷 第 4期 分 析 科 学 学 报 2005年 8月
Vo1.2l NO.4 JOURNAL ()F ANALYTICAL SCIENCE Aug. 2005
文章编号 :1006—6144(2005)04—0444—05
超 临界流体色谱在生物工程 中应用的新进展
杨长龙 。,胡浩权 ,张维冰 ,张玉奎
(1.大连理工大学化工学院,辽宁大连 116024;2.大连化学物理研究所 ,辽宁大连 116011;
3.齐齐哈尔大学化工学 院;黑龙江齐齐哈尔 161006)
摘 要 :超 临界流体 色谱 (SFC)是高效液相 色谱 (HPLC)和气相 色谱 (GC)的重要补充
技 术。用 SFC可 以分离多数不能用GC分 离的低挥发性物质。与传统的 HPLC相 比,
SFC的分 离速度更快、效率更高。本文综述 了SFC在生物分子分 离分析方面应用的新
进展 。引用文献 74篇 。
关键词 :超临界 色谱 ;生物分子 ;分离;综述
中图分类号 :O657.7 文献标识码 :A
l 引言
超临界流体色谱 (SFC)是以超临界流体 (sF)为流动相的色谱过程。超临界流体的密度接近于液体,
粘度接近于气体,扩散系数介于两者之间,因而具有 良好的溶解能力和传质特性。 自Lovelock首先提 出
用 SF作为色谱流动相的设想 和 Klesper等发表了第一篇超临界流体色谱方面的论文后 ,该技术得 到了
快速的发展 。进入 20世纪 80年代 ,随着毛细管 SFC技术 的出现 ],超临界色谱技术 日趋完善 。SFC作
为气相色谱 (GC)和高效液相色谱 (HPLC)的补充 ,具有以下优点 :(1)SFC的分离温度比GC低 ,分离 /分
析热敏性 、非挥发性样品明显优于 GC;(2)与 HPLC相比,SFC的分离速度更快、样品处理方便 ,并常表现
出较高的选择性 ;(3)SFC可以兼容多种检测器 ,实现联机在线色谱联用技术,如 SFC—MS[3 ]、SFC—FT—
IR[引、SFC—NMR【等 。
CO。是最常用 的SFC流动相 ,它具有无毒、临界条件适 中(Tc=31.2℃,Pc一7.3MPa)、环境友好等
特点,非常适合于分离分析生物样品。虽然其极性较低 ,但通过添加适 当的改性剂,几乎可以对所有 的极
性化合物进行有效的洗脱 -1 。SFC的应用领域非常广泛 ,可用于分离分析热敏性物质、非挥发性高分
子、生物大分子和手性对 映体n卜¨]等。本文对 SFC在生物工程领域 中应用 的新近进展加以系统综述 。
2 超 临界流体色谱用于分离生物样 品
2.1 糖类
很多种色谱方法可用于糖类的分析 (如 LC、CE等),但都存在一定的局限性 ,最简单 的方法是无需对
样品进行衍生化处理 。CE的分离效率高且需要的样 品量小 ,但一般要对样品衍生化 ,未衍生化分离样品
的报道较少。由于该类化合物中多数含有低 聚或多聚体 ,用 LC分离时需要梯度洗脱 ,比较麻烦 。用 SFC
分离分析糖类相对要容易得多,一般无需进行衍生化处理 ,并有较高的分离选择性[1 。
ChesterE¨最早用纯 CO。作为SFC的流动相,研 究了低聚糖、多聚糖及聚甘油酯 的保 留性质 ,研究结
果表明,对于含一到四个 自由羟基 的聚甘油酯类 ,用纯 CO。可以分离,但峰形较宽且有拖尾 ,尤其是含有 四
个 自由羟基的聚甘油酯 ,峰形更差。若将样品衍生化可使保 留值下 降且峰形变窄。聚糖在纯 CO。中的溶
解度太低,不易分离 ,而用硅烷衍生化后 ,可以分离洗脱且峰型 良好 。Garrand0]采用蒸发光散射检测技
术(ELSD),对两种单糖进行 了简单的分离 。
由于糖类是极性较强的化合物 ,目前用 SFC分离时通常需在主流动相 CO。中加入第二组分 ,作为流
收稿 日期 :2003—05—18 通讯联系人:杨长龙
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第 4期
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