细菌耐药推荐.ppt

细菌耐药机制及检测 一、细菌耐药的遗传机制 细菌耐药性的遗传学机制主要指细菌的耐药性通过基因突变(即染色体介导的耐药性)获得，或通过质粒或转座子水平传播获得外源耐药性基因，也可通过整合子捕获外源基因使之转变为功能性基因来传播耐药性。 1、染色体介导的耐药 2、质粒介导的耐药 3、整合子介导的耐药 二、细菌耐药的化学机制 （一）产生灭活抗生素的各种酶 (二 ) 膜通透性下降 （三）抗菌药物作用靶位改变 （四）细菌主动药物外排机制 （五）细菌生物被膜的形成 几种常见的可灭活抗生素的酶 1、β-内酰胺酶(β-lactamase) （1）超广谱β-内酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamases,ESBLs) （2）头孢菌素酶（AmpC酶） （3）碳青霉烯酶 （4）金属酶 2、氨基糖苷类抗菌药物钝化酶 3、MSL类钝化酶 4、氯霉素钝化酶 三、当前主要的耐药性问题 革兰阳性菌：耐青霉素肺炎链球菌（Penicillin resistant Streptococcus pneumoniae,PRSP）；耐甲氧西林葡萄球菌（Methicillin resistant Staphylococci,MRS）；耐万古霉素肠球菌（Vancomycin resistant enterococcus,VRE）及耐万古霉素金黄色葡萄球菌（Vancomycin resistant S.aureus,VRSA）。 革兰阴性菌：产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌(ESBLs)；持续高产Ι型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌、枸橼酸杆菌等；多重耐药的铜绿假单胞菌、不动杆菌、嗜麦芽窄假单胞菌。 对异烟肼和利福平耐药的多重耐药结核分枝杆菌（Multidrug resistance Mycobacteria tuberculosis,MDR-Tb）。 四、主要的耐药性检测方法 （一）耐青霉素G的肺炎链球菌（PRSP） 筛选试验：1μg/片苯唑青霉素，MH琼脂+5%羊血，35℃含5%CO2%环境中孵育20-24小时，抑菌环直径≤19mm耐药，≥20mm敏感；确证试验：稀释法测定青霉素MIC，MIC≤0.06μg/ml敏感 ≥2μg/ml耐药。 （二）耐甲氧西林的葡萄球菌（MRS） （1）纸片筛选法：含4%NaCl的MH琼脂，30μg/片头孢西丁，33-35℃，24小时。对于金黄色葡萄球菌，抑菌环直径≤19mm，为MRSA，抑菌环直径≥20mm，为MSSA；对于凝固酶阴性葡萄球菌，抑菌环直径≤24mm，为MRCONS，抑菌环直径≥25mm，为MSCONS。 （2）琼脂筛选法：MH琼脂中加入6ug/ml苯唑西林、4%氯化钠，直接菌落悬液法，涂布接种，≤35℃，孵育至24小时。任何有生长的现象均为MRS。 （3）乳胶凝集或基因扩增法直接检测MecA基因。 （三）万古霉素中介或耐药的葡萄球菌，VIS或VRS 筛选方法：MH琼脂，万古霉素（30μg/片），抑菌环直径≤14mm应测MIC；肉汤稀释法MIC8～16μg/ml为VIS，MIC≥32μg/ml为VRS。任何耐万古霉素的葡萄球菌均应送参考实验室进一步检测。 （四）耐万古霉素的肠球菌 检测方法：30μg/片万古霉素，抑菌环≤14mm为耐万古霉素肠球菌。 （五）超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrumβ-lactamases ESBLs） （1）药敏推测法：根据ESBLs能水解三代头孢的原理进行检测。用标准琼脂扩散法测定头孢他啶、氨曲南、头孢噻肟、头孢泊肟和头孢曲松的抑菌环直径，按NCCLS标准进行判断。凡头孢他啶抑菌环直径≤22mm、头孢泊肟抑菌环直径≤17mm、氨曲南或头孢噻肟抑菌环直径≤27mm、头孢曲松抑菌环直径≤25mm，任何一种药物抑菌环直径达到上述标准，或用稀释法检测上述药物的MIC大于等于2ug/ml,均疑为ESBLs菌株。应进一步作确证试验确诊。 （2）表型确证试验：根据ESBLs可被克拉维酸抑制的原理，按NCCLS推荐的指南进行操作，包括纸片法和稀释法。前者采用头孢他啶(30μg)及头孢他啶/克拉维酸(30μg/10μg)组合，头孢噻肟(30μg)及头孢噻肟/克拉维酸(30μg/10μg)组合，任一组药物的抑菌环的直径差≥5 mm时，判定为ESBLs阳性株。 （3）双纸片协同法：根据ESBLs可水解三代头孢，有可被克拉维酸抑制的原理，将阿莫西林/克拉维酸抑制纸片置于头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南中间，使两纸片中心间距为20～30mm，如果在阿莫西林/克拉维酸与任何一种纸片间出现协同抑菌现象,视为产ESBLs株。此法操作简便，特异性、灵敏度菌较好，可作为检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs