经典一组织培养技术推荐.ppt

* 病 毒 检验方 法 病毒培养 全程5-30天 病毒培养： 1.细胞培养 2.接种至细胞 细胞病变判定 荧光染色： 1. 病毒涂片 2. 血清型专一 抗体荧光染色 中和试验： 培养出的病毒与血清型专一性抗血清作用，再接种至细胞 * 用培养方法研究病毒学的优点： 没有隐性感染，避免体内实验的假阳性或假阴性结果。 没有免疫抵抗力 可选出培养方法可以选择出最易感的细胞进行研究 可增加接种量 获取减毒株或无毒株较其他方法容易 大规模植被病毒疫苗，可提高产量，降低成本，还可以是培养液中的异性蛋白减低至最低限度,提高疫苗质量。 可快速分离鉴定病毒 * * 二、免疫学研究的应用 免疫细胞检测 T、B淋巴细胞分离培养技术 淋巴细胞转化试验 混合淋巴细胞培养 抗体产生细胞检测 * 杂交瘤细胞培养技术 目前，已能够利用大规模培养技术培养杂交瘤细胞生产抗体、不仅可以提高产量、简化工艺、降低成本，而且可以提高抗体质量。 * Hybridomas 杂交瘤技术 * 单克隆抗体制备流程： 用特异抗原免疫实验动物 取含大量B细胞的脾细胞 鼠骨髓瘤细胞 细胞融合 筛选杂交瘤细胞 生产单克隆抗体 * 杂交瘤细胞产生 单克隆抗体示意图 * 细胞因子检测技术 免疫酶技术 * 三、分子生物学研究的应用 1. 体外培养细胞的转化 细胞自发转化和人工诱发转化 BHK-21, NIH/3T3, Rat-1, PC-12 * 2. DNA转导技术 基因转导细胞 染色体转导 基因转导 细胞融合、显微注射 染色体转导 基因转染（体细胞） 转基因（生殖细胞） 磷酸钙、电击、脂质体、 逆转录病毒介导法、 其他DEAE-葡聚糖法 个体发育、检测目的基因表达（转基因技术） * 3. 基因诊断和基因治疗 原位修复有缺陷的基因 基因替代疗法 重新开放已关闭的基因 导入基因（p53 ,RB） 封闭基因 （反义RNA） * 四、遗传学研究的应用 性染色体的检测 间期细胞核内女性X染色体和男性Y染色体均可用特殊染色法显示出来，女性的两个X染色体中的一个，在间其时的染色质呈异固缩，呈深染的小体称巴氏小体，位于间期细胞核内面，呈三角形或半月形小体易为炭酸复红或硫堇等染料着色。正常女性巴氏体阳性,男性为阴性。男性Y染色质位于间期细胞核近中央部，荧光染色发较强荧光，呈点状小体，发光部分为Y染色体异固缩的长臂。 初代培养细胞和二倍体细胞株均可观察到性染色质，传代细胞系表现不规律。 * 培养细胞染色体显示 显示染色体主要是显示分裂中期细胞。因细胞分裂出于中期时，染色体的长短和大小适合，是研究染色体的最好阶段。 准备工作的原则： 获得多量的中期分裂相 分散密集并相互缠绕的46条染色体 * 措施： 提高细胞分裂相数 刺激细胞增殖：PHA 阻抑中期分裂：秋水仙素 促染色体分散措施 低渗处理：低渗盐溶液 醋酸固定：膨胀固定组织细胞，和醇类混合固定有利于染色体松散效应。 * 染色体结构显带和检测 染色体显带、染色体脆性部位的检测、微核检测 染色体基因定位 核素标记原位杂交基因定位技术 荧光标记原位杂交基因定位技术 染色体显微切割法 * 五、 药理学研究的应用 体外细胞培养测定药效研究的优点： 已建的细胞系（株）提供大量的遗传特性均一或相似的细胞来源，使药物筛选研究工作稳定、方便、经济。 可准确控制药物作用的对象、作用时间和剂量以及细胞的生长条件。 将待检测药物或其他化合物直接加到培养系统中，使之直接与效应细胞相接触。 * 不足： 体外检测的细胞生长环境简单而体内复杂 进行活性检测时，比较容易和适宜于单质药物，水溶性药物较容易。 * 适用范围： 较适宜于研究抗癌药物和能够致畸、致癌、致突变的化合物。及抗病毒药物 细胞选择 选择适当的效应细胞和对照细胞 结果观察：形态学观察、细胞生物学检测、生物化学测定、分子生物学检测以及细胞死亡评价等方面。 药效测定法 抗病毒药效测定 抗癌药效测定 * 六、组织胚胎与细胞生物学的应用 器官培养与发育分化研究 体外培养整个胚胎的生长发育 胚胎致畸作用的研究 器官的功能及其代谢的研究 器官移植中的应用 器官细胞的体外培养 胚胎干细胞的体外培养 造血干细胞的体外培养 其他器官细胞的体外培养 * 细胞生物学上的应用： 细胞形态学：借助体外培养技术尤其是通过与显微缩时电影技术结合，观察到许多细胞生长行为。 细胞生理方面：确定了培养细胞的营养需