脓汁和粪便标本中病原菌的检测-2推荐.ppt

37℃培养24小时 * 生物安全警告 接种环接种平板一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径＞100um沉降很快，＜50um在0.4s内扩散开，＜5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在火焰周围10～20厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。 * 思考题 为何取链球菌作为空气的卫生指标之一? 为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌? 为什么接种环使用前后必须烧灼灭菌？忽略了有什么危害? 做细菌培养时，平板为什么要倒置? 培养细菌的常用方法有哪些? 从临床标本中分离病原菌，应注意哪些事项? * 实验内容 空气的细菌学检查P38 营养琼脂平板(黄色,1组1个） 手指皮肤的细菌学检查P41 营养琼脂平板(黄色,2人1个 → 划分8格） 平板划线分离法P8 甲→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色） 乙→脓汁标本→营养琼脂平板(黄色） 丙→粪便标本→伊红美蓝平板(紫色） 丁→粪便标本→伊红美蓝平板(紫色） * 常用器材摆放顺序：电源插座→试管架→酒精灯→污物盘。 试管架上器材：靠近插座一侧第1和第2列分别放置接种针 和接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。 ※器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。 * 实验器材 整齐有序 * 微生物学器材柜-2（边台东侧中段） 酒精棉球 碘酒棉球 镊子 电炉、石棉网 手套 消毒器材收拾入柜 依次摆整齐 ↓ * 器材准备 浓汁标本1支，粪便标本1支；碘酒棉球1瓶，酒精棉球 1瓶，眼科镊子2把；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板5个。 自然界中的微生物 已经发现的微生物大约13万5千多种，被认为非常危险的有600种，在人间传染的病原微生物380种。这些微生物存在于地球的各个角落，从寒冷的极地到炎热的赤道，从4.2千米地层深处到85千米高空（芽孢）,均有它们的踪迹 。 空气、水、土壤、人体的体表以及与外界相通的腔道，均有不同种类和数量的微生物存在。 存在于人体消化道的细菌超过800种，数量可达100万亿（1014），菌体重量1～1.5公斤。 * 医学微生物学实验综合性实验三  Comprehensive Experiment 3 空气与人体体表细菌学检查 空气的细菌学检查P38 手指皮肤的细菌学检查P41 * 空气的细菌学检查P38 空气是人类赖以生存的环境之一，也是重要的疾病传播媒介。空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分泌物。这些污物，因风吹，以及人类日常活动，以气溶胶的形式悬浮于空中，使空气受到污染。 环境：不利于微生物生长。 种类：主要是病毒、真菌和细菌。在医院，公共场所致病菌的数量比较多。 作用：可迅速全球传播。 危害：引起培养基、生物制品的污染，病原菌引起呼吸道传染病。 * 实验方法：自然沉降法是根据空气中细菌气溶胶粒子，在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到培养基表面；培养以后，计数菌落形成单位（ colony forming unit ，CFU），了解空气的污染情况。 实验步骤：每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、宿舍、卫生间、饭堂或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁，平板暴露于空气中15分钟，然后盖上盖子，作标记。37℃温箱培养24小时，观察结果。 ★ CFU/m3 ＝ 50000N÷AT≈86N(直径7cm平板）。 N：平板上的菌落数。 A：平板面积(平方厘米)。 T：采样时间(分钟)。 * 空气的细菌学检查 暴露法（Exposure Method) 组号 地点 时间(min) 菌落形成单位(CFU) 1 卫生间 15 2 食堂 15 3 门诊大厅 15 4 呼吸科病房 15 5 呼吸科ICU 15 6 外科病房 15 7 外科ICU 15 8 外科治疗室 15 9 婴儿室 15 10 实验室 15 * 手指皮肤的细菌学检查P41 在日常生活中，手的接触范围广，使用频率高，受到污染的机会也最多。一只外观比较“干净 ”的手，可携带10万个细菌、200多种病毒。因此，经手传播的疾病很多，范围很广，包括肠道传染病、部分呼吸道传染病、皮肤传染病，以及一切可经手间接传播的疾病。 常住菌：存在于皮肤表面、毛囊和皮脂腺。种类和数量比较恒定。附着在皮肤上比较牢固，用一般洗手方法，常不易去除。 暂住菌：存在于皮肤表面经常暴露的部位。暂住菌是外来的非正常菌群，种类和数量不定。引起人类致病的通常是暂住菌。 * 医务人员，经常要与病人接触，不管是直接接触，还是间接接触，都有传播病菌的可能。虽然病菌的直接来源是患者, 但是造成病菌扩散的主要途径则是气溶胶和医务人员的手。