色谱学 lecture 7推荐.ppt

Reversed-Phase vs. Normal Phase Separation of 2-Me-Phenol and 4-Me-Phenol in RP and NP Reversed-Phase MeOH/Water, Luna-C18 Normal Phase Hexane/IPA, Luna-Si 90/10 60/40 95/5 98/2 *  Tocopherols Tocopherols Tocotrienols R1 R2 a-Tocopherol (a-T) a-Tocotrienol (a-3)_ Me Me b-Tocopherol (b-T) b-Tocotrienol (b-3) Me H g-Tocopherol (g-T) g-Tocotrienol (g-3) H Me d-Tocopherol (d-T) d-Tocotrienol (d-3) H H Tocotrienols Genesis silica column (250 x 4.6 mm, 4 ?m). Mobile phase: Hexane-1,4-dioxane (96:4). . J. Chromatogr. A, 881 (2000) 217-227 Separation of synthetic tocopherols by reversed phase HPLC (280 nm) :1) d-tocopherol, 2) g-tocopherol, 3) b-tocopherol, 4) a-tocopherol, 5)a-tocopheryl acetate Food Chemistry, 76 (2002) 357 – 362. Experimental Comparison of NP and RP HPLC * 液液色谱法的固定相 由载体与固定液构成 载体: 全多孔型或薄壳型 涂渍适当的固定液 化学键合固定相 液---液分配色谱法固定相 * * 利用化学反应的方法通过化学键把各种不同的有机分子（固定液）键合到载体表面，这样制得的填料称化学键合相，简称键合相。其优点是： ①使用过程中固定液不遗失；②化学性能稳定，在pH2～8的溶液中不变质；③热稳定性好，一般在70℃以下稳定；④选择性好；⑤利于梯度洗脱。 化学键合固定相 * 这类键合相表面键合的是极性很小的烃基，如十八烷基(C18）、辛烷基（C8）、甲基与苯基等。其中以十八烷基硅烷键合硅胶（或称ODS）应用最为广泛，在化学键合相中约占 80％。它适合分离非极性或极性小的试样。在应用中可选用极性较强的溶剂，如水。甲醇、乙醇或无机盐的缓冲液作流动相。 十八烷基键合相（ODS键合相）是将十八烷基氯硅烷试剂与硅胶表面的硅羟基，经多步反应生成ODS键合相。 非极性键合相 * 晶体电阵计算:硅胶表面的硅羟基密度为8个/nm2。 化学法测定:5个/nm2， * Si-OH + HO-R Si-OR + H2O 它的反应条件是在150-250度下反应3-8小时 HPLC早期的一种正相键合填料 Si-O-Si键型（硅胶与醇类物质反应） * Si-OH + SOCl2 Si-Cl + SO2 + HCl Si-Cl +R-NH2 Si-NHR +HCl Si-N键型（硅胶与胺类物质反应） * 利用格里亚反应合成固定相。 Si-Cl +RXMg Si-R +MgXCl 稳定性相当好!!! Si-C键型（硅胶与卤代烷反应） * Si-OH +X-Si(R)(R1)(R2) Si-O- Si(R)(R1)(R2) +HX 反应式中，X为Cl、CH3O或C2H5O，R1、R2可以与X 相同，也可以是甲基。 主导键合类型，具有良好热、化学稳定性，pH 2-9 Si-O-Si-C键型（硅胶与有机硅烷反应） * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 二极管阵列检测器 Beer定律 A=? b C 特点: 可得到吸收光谱 定性功能强 峰纯度检验 10-8 g / ml * 光电二极管阵列检测器 * 荧光检测器 Stokes荧光 F=2.3 QKI0?bC 10-12 g / ml 特点: 特征性强、灵敏 * 示差折光检测器 示差折光光路结构示意图 R=Z C（ni - n0） 10-