芮勇宇2011-3-14临床细菌学检验推荐.ppt

* * * * * * * * * * * 第一部分：标本分类、标本采集注意事项、涂片及鉴定结果解读； 第二部分：药敏结果解读； 第三部分：难鉴定细菌真菌分子鉴定新技术。 * 临床常见细菌鉴定要点 * 临床常见细菌鉴定要点 G+球菌 G-球菌 G-杆菌 G+杆菌 氧化酶，O/F 肠杆菌科 非发酵菌 分枝杆菌 菌落特征、革兰/抗酸染色 触酶 葡萄球菌+ 肠球菌- 链球菌- 触酶，氧化酶 奈瑟菌++ 布兰汉菌++ 4糖：葡乳麦蔗 DNA， N硝还 * 临床常见G+球菌鉴定要点 葡萄球菌 链球菌 肠球菌 触酶+ 触酶— 触酶— 金葡 溶血 凝固酶+ 溶血葡 溶血 凝固酶- 表皮葡 不溶血 凝固酶- 肺炎链 α溶血 奥扑托辛S 化脓链 β溶血 杆菌肽S 无乳链 β溶血 CAMP+ 高盐 七叶苷 阿拉伯糖 屎肠 阿+ 粪肠 阿- * 发酵菌 氧化/发酵，+/+ 肠杆菌科 例外：非发酵菌 氧化/发酵，+/- 不动杆菌：G-球杆菌； 嗜麦芽寡养单胞菌：菌落黄色。 例外：发酵菌 氧化/发酵，+/+ 弧菌属 非发酵菌 氧化/发酵，+/- 假单胞菌属 氧化酶- 氧化酶+ 临床常见G-杆菌鉴定要点 O/F，KIA 肠杆菌科生化 O/F 非发酵菌生化 血清学鉴定 O157：H7、沙门菌属、志贺菌属 血清学鉴定 * 临床分离细菌真菌中，有少部分通过传统生化反应和表型方法难以鉴定，给临床诊断和治疗带来困难。 目前细菌真菌核糖体基因序列分析，已经成为分类的金标准。 随着分子生物学技术的飞速发展，根据细菌和真菌基因组的特点，对它们的核糖体基因进行扩增并测序，可以准确阐明难鉴定病原菌的属种。 * 细菌的16S rRNA编码基因由保守区和可变区组成，保守区为细菌共有，细菌间无差别,可变区具有属种差异。 真菌的5.8S rRNA基因和28S rRNA基因由保守区和可变区组成，它们之间的ITS2区域也有属种差异。 * 本研究利用通用引物扩增分别扩增细菌的16S rRNA基因和真菌核糖体的转录间隔区2（ITS2）， 对PCR产物进行测序，将序列结果在GenBank进行Blastn比对。 具体方法略，相关研究即将发表。 * * * * * * 本研究从血液中检出2例临床不常见细菌。 1例是生痰二氧化碳嗜纤维菌，G-球菌，是人类口腔的正常菌群，属于条件致病菌，常通过口腔粘膜进入血液，感染者大多患有血液系统恶性肿瘤或粒细胞减少等疾病。该例患者岁，男性，诊断为地中海贫血，来自小儿科层流病房。 * 另外1例是根癌农杆菌，G-杆菌，普遍存在于土壤，生活在植物根的表面，依靠由根组织渗透出来的营养物质生存，能诱发植物产生肿瘤，一般应用于植物的转基因研究。该例患者20岁，女性，诊断为急性胰腺炎，来自消化内科。 上述2例细菌引起的败血症国内文献未见报道，国外有4例病例报道。 * 本研究检出4例临床难鉴定真菌。 第1例是马尔尼菲青霉菌，常感染艾滋病患者，本病多见于东南亚。该例患者39岁，男性，艾滋病抗体阳性，以肺炎收治于感染科。 * 第2例是Arxiozyma telluris，属于产孢子酵母菌，首次从南非土壤分离得到，大都感染啮齿类动物和鸟类，较少感染人、猪、牛。此例标本来源是痰液，与白色念珠菌混合感染。该例患者82岁，女性，以肺部感染收治于呼吸内科。 * 第3例是黑曲霉菌，标本来源是患者耳部脓液。该例患者25岁，女性，就诊于耳鼻喉门诊，诊断为慢性化脓性中耳炎，国内文献报道耳部真菌感染的主要病是黑曲霉菌。 * 第4例是镰孢菌，标本来源是眼部分泌物。该例患者48岁，女性，诊断为角膜炎，来自眼科。我国镰孢菌所引起的真菌性角膜炎占真菌性角膜炎体的近40％。 * Thank you! * * * 七、分泌物（伤口或脓液）病原菌检验 封闭性脓肿：可用注射器穿刺抽取。 疑为厌氧菌感染者：取脓液后立即排净注射器内空气，针头插入无菌橡皮塞送检；外界相通部位的标本，如痰不能作厌氧菌培养。 * 七、分泌物（生殖道）病原菌检验 性传播疾病，简称性病，是一组通过性行为传播的，侵犯皮肤、性器官和全身多脏器损害的感染性疾病。 标本采集：常取生殖道分泌物，男性取尿道口分泌物或前列腺液，女性取外阴糜烂面病灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌物等。 * G-双球菌 * 白带 * 淋病 涂片染色镜检： 急性淋菌性尿道炎敏感度和特异度高达90%以上；对慢性无症状淋病的女性患者涂片检查漏诊率达40%，故必须同时进行培养。 培养鉴定及药敏结果准确，诊断金标准。 * 解脲/人型支原体： 开展了培养鉴定及药敏试验； 需注意的是标本采集后应尽快送检。 诊断试剂和方法要符合卫生部相关规定； 注意保护病人的隐私。 * 八、器械病原菌检验 静脉插管等标本：放入无菌试管中送检； 无菌试验：怀疑医疗用品被污染时送检； 空气培养：到细菌室取培养