嗜热链霉菌Thermophilicstreptomycetes的生化特性.PDF

纖維酶 生產菌株的篩選與菌種鑑定 篩菌策略 ： 要篩特定活性的菌株只要從對應的環境中即可篩選到想要的菌 株，本實驗主要目的是篩選具有耐高溫纖維酶活性的菌株。首先要決 定採樣地點，採樣地點的選擇則先思考什麼環境含有豐富的纖維素， 而且這個環境本身長年或某段時期的溫度較 40℃高，這樣的環境下 可能比較容易篩選到耐高溫纖維酶菌株。 採樣地點：一般篩選耐高溫纖維酶菌株最常見的環境 -堆肥；另 一採樣環境則選擇了牛的瘤胃。目前從堆肥中篩選到三株菌株，其在 活性培養基 45℃培養一天即可清楚觀察到明顯的澄清環，另外從 牛 之第四個瘤胃中篩選 到一株可長於 55℃的細菌株，由菌落的外觀與 顯微鏡的觀察判讀 堆肥的菌株應是屬於桿菌屬，而牛瘤胃所篩選到的 菌株應屬於放線菌科， 細菌菌種的鑑定則 主要利用 16S rDNA的方 法 ，使用 一對保留性引子使用聚合酵素連鎖反應增幅其 16S rDNA ， 所得 1.5 kb DNA 序列經由定序後，以 NCBI的 BLAST 分析，堆肥中 桿菌屬的菌株主要與枯草桿菌類相似度最高，而牛瘤胃所篩選到的菌 株則與一些嗜熱鏈黴菌具有高達 99％的序列相同性，可知此菌株應 為鏈黴菌屬(Streptomycetes中的嗜熱菌) 。 材料方法與步驟 ： 一、實驗藥品 ： Tryptone 、Yeast extract 、Nutreient broth購自 Difco 公司、Agar 、Tris 購 自 Zymeset 公 司 、 Agarose LE 購 自 Mdbio 公 司 、 Carboxymethylcellulose購自詮智實業有限公司、 KH PO購自 Merck 2 4 公司 。 二 、培養基之配製 1. 纖維水解酵素活性培養基組成份(每公升) ： Carboxymethylcellulose 10 g 、Nutreient broth 1～8 g 不等 、agar 15 g 、痕量元素 (pH 7.0) 。 2. 痕量元素組成份 (每公升) ： (NH ) SO 1.3g、MgSO ‧7H O 0.25g 、CaCl ‧2H O 0.07g 、FeSO ‧ 4 2 4 4 2 2 2 4 7H O 0.02g 、KH PO 0.28g 、ZnSO ‧7H O 0.22mg 、CoCl ‧6H O 2 2 4 4 2 2 2 0.01mg 、MnCl ‧4H O 1.8mg 、CuSO ‧5H O 0.05mg 、H BO 4.5mg 。 2 2 4 2 3 3 3. pH 緩衝液(100 mM) ： Sodium acetate-ucetic acid ：pH 3.7-5.6 、KH PO -K HPO ：pH 2 4 2 4 5.8-8.0 、Tris-HCL ：pH 7.0-9.0 、Glycine-NaOH ：pH 8.6-10.6 、混 合 LB培養基。 4. Luria-Bertain培養基組成份 (每公升) ： Tryptone 10 g 、yeast extract 5 g 、NaCl 10 g 、agar 15 g 、將其溶於 RO水中 5. Nutreient Agar培養基組成份 (每公升) ： Nutreient broth 8 g 、agar 15 g 三 、菌株之篩選