土壤细菌群落密度实时荧光定量PCR检测体系的建立-土壤与作物.PDFVIP

第1卷第2期 土 壤 与 作 物 Vol郾1, No郾2 摇 2012年6月 SOIL AND CROP Jun郾 ,2012 摇 土壤细菌群落密度实时荧光定量 PCR检测体系的建立 1,2 1 1,3 4 顾摇 卿 , 许艳丽 , 魏摇 巍 , 刘摇 爽 (1郾 中国科学院 东北地理与农业生态研究所 黑土区农业生态院重点实验室, 海伦农田生态系统国家野外观测研究站, 黑龙江哈尔滨 150081;2郾 东北林业大学, 黑龙江哈尔滨 150040;3郾 中国科学院研究生院, 北京 100049; 4郾 中国科学院生态环境研究中心, 北京 100085) 摘摇 要: 为了建立土壤环境样品中细菌群落的定量分析体系, 选用了多环芳烃污染土壤处理P1和P2, 以及无多环芳烃污 染的裸地生态系统土壤 C等3 种处理, 利用构建克隆子的方法制作标准样品, 并对实时荧光定量PCR标准曲线的线性 2 2 (R )、 扩增效率 (E) 以及斜率 (S) 等相关参数进行了优化。 结果表明, 标准曲线的线性R =0郾985、 扩增效率E = 101郾7 %以及斜率S = -3郾282, 均符合参数符合要求。 土壤样品P1、 P2 和 C 的细菌16S rDNA 片段拷贝数为1郾4 伊109 -1 9 -1 9 -1 个·g 、4郾0伊10 个·g 和5郾0伊10 个·g 。 说明建立的实时荧光定量PCR检测体系可以灵敏地定量未知模板的土壤细菌数 量。 图3, 参11。 关键词: 土壤微生物; 实时荧光定量PCR; 绝对定量 中图分类号: S154郾3摇 摇 摇 摇 文献标识码: A摇 摇 摇 摇 文章编号:2095-2961 (2012) 02-0117-04 The Establishment of the Real鄄Time PCR System for Detecting Soil Bacteria Abundance 1,2 1 1,3 4 GU Qing ,XU Yan鄄li ,WEI Wei ,LIU Shuang (1郾Key Laboratory of MollisolsAgroecology,National Observation Station of HailunAgroecology System,Northeast Institute of Geography andAgroecology,CAS,Harbin 150081,China;2郾Northeast Forestry University,Harbin 150040,China; 3郾Graduate University of ChineseAcademy of Sciences,Beijing 100049,China; 4郾Research Centrefor Eco鄄environmental Sciences,CAS,Beijing 100085,China) Abstract:For establishing the system of quantitative analysisfor soil bacteriapopulation,3 so