微生物的培养与分离技术.DOCVIP

微生物的培養與分離技術 原理 微生物的培養方法可分為混合培養與純種培養兩類，混何培養是利用一種以上的微生物進行培養，表現其群體生存之共同特性，環境工程中二級生物處理法處理廢水時活性汙泥之生長、衛生掩埋法進行固體廢棄物的處理為混合培養的典型實例。而純種培養是以單一微生物菌種及其衍生細胞進行之。 二、分離 微生物經由增值步驟可將欲研究的菌種於選擇性培養機中大量繁殖，然而可能仍有少數其他菌種存於騎中，無法完成純化，因此有必要進一步利用分離技術，將為生物分離成一獨立菌落，達成純種培養。分離方法之園裡主要是藉使菌數漸次遞減，最中達成單獨分離之目的。 設備 器材 錐形瓶 10.酒精燈 2.接種環 11.隔熱手套 吸球 12.秤藥紙 秤藥勺 13.燒杯 螺紋試管 玻棒 簽字筆 玻璃培養皿 三角彎棒 定量玻璃吸管 儀器 電子天平 高溫高壓滅菌釜 電磁加熱攪拌器 水浴鍋 無菌操作台 微風恆溫培養箱 冷藏箱 試劑與培養基 (一、)試劑 1.消毒酒精( 70 % ) 假設需配置70 % 酒精100 ml需要X ml 的 95 % 酒精 計算方式為100 : 0.95 = X : 0.7 經計算可得需要之95 % 酒精 X = 73.6 ml 因此欲獲得100 ml 70 % 消毒酒精 = 73.6 ml 95 % 酒精 + 26.4 ml 蒸餾水位確保消毒效果、實驗誤差以及方便配置，一般以 80 ml 酒精與 20 ml 蒸餾水，即 95 % 酒精:蒸餾水 = 4 : 1 均勻混合即得 70 % 酒精。 (二、)培養基 1.營養瓊脂培養基 ( NA ) NA的配置方法為:每1000 ml蒸餾水需23.0 g NA 培養基 承裝容器估算為每1個容器需要25ml培養基 此次配置需要6個 因此需要150ml培養基 23/1000:(所需量稱之NA量)/(150ml培養基) 所需量稱之NA量=3.45g，150ml蒸餾水 菌種或採樣來源 (一)菌種 無 採樣來源 崑山湖活性汙泥水 酵母粉 操作流程 倒碟法 稀釋樣品~以濕熱滅菌後的培養基以水浴鍋冷卻~用玻璃定量管各1ml和配好的NA培養基倒入培養皿等凝固。 塗碟法 吸取樣品1ml，置於9ml無菌水做10倍稀釋，取10負3到10負5濃度菌液~用已滅菌之三角彎棒將滴完兩滴稀釋菌液培養皿進行塗碟~完成後放置於37度C培養箱靜置結果。 劃碟法 將已經倒碟完成凝固的培養皿拿來用~樣品濃度稀釋~接種環用酒精燈加熱滅菌後沾取菌液使中間小圓圈有泡泡狀進行劃碟~二次劃碟要在培養基上冷卻再用之前塗過的地方再沾取劃碟，將整片培養皿劃滿就完成了。 實驗成果 倒碟法 10負3次濃度兩個，菌落數有明顯產生 6個 4個，其中有兩個較大的菌絲狀物體 10負4次濃度兩個，但是菌落數明顯減少至難以辨識 2個 2個 10負5次濃度兩個，經過這次慘痛經驗不知道會對分數有多少影響，但老師我們真的學乖以後不會了 (二、)塗碟法 10負5次濃度兩個，少到可以用目視算出它的數目 107個 84個 10負4次濃度兩個，稀釋後菌數還是多到數不清眼花撩亂 10負3次 濃度兩個，非常之多 (三、)劃碟法 伯里:長出菌了 佳宜:無菌 雍仁:一點點菌 婉君:一點點菌 老師:一個菌 八、問題與討論 1.討論以三種分離技術所得之實驗結果是否成功地分離微生物，即在培養基上形成單一菌落？若無單一菌落，說明實驗可能失敗的原因。 有部分的培養基上會形成小菌落，有些沒有。實驗失敗原因是因為塗碟法的菌液塗抹不夠均勻，而造成菌液而不能分離出單一菌落；若是使用倒碟法就可能是將稀釋的菌液與培養基沒有搖動混合均勻，造成分離不佳；若是劃碟法可能沒有把菌液均勻劃於固體培養基表面，造成分離不佳。 2.為何實驗須有對照組，其目的為何？若對照組上有微生物生長代表什麼意義？ 實驗中應有對照組，它是用來判斷實作過程中的準確性，如操作時是否保持無菌狀態。 而對照組微生物生長表示實驗操作過程中是否有細菌進入，而影響實驗結果的準確性。 心得 石佳宜 這個實驗讓我學習到如何劃碟， 還有培養基配製好真的要馬上倒入培養皿裡， 不然培養基很快就凝固了。 王雍仁 倒碟法跟之前的培養基配置一模一樣，還蠻簡單的，但是蠻嚴重的問題是我們在水浴鍋冷卻的太久導致培養基太快凝固所以最後兩個培養皿就如上面兩個都剩下果凍狀的殘骸，塗碟法因為之前實驗也有做過所以