医院感染监测微生物实验室基本技能精选.ppt

* 医院洁净手术部建筑技术规范 （GB50333-2002） 4.撞击式采样器原理及组成 撞击法：使用撞击式空气微生物采样器采样，由6层孔径不一的撞击器组合成一体，采样时空气中的活性粒子通过各层筛孔由大至小有规律地分别撞击在各层平板上。不仅能测得空气中带菌粒子浓度，还能测出其大小分布情况； 仪器组成：采样器（主体）、抽气泵、流量计及平皿等部件； 选择采样器原则：捕获率高；性能稳定、使用方便、易消毒；噪声低； * 医院洁净手术部建筑技术规范 （GB50333-2002） 5. 检测要求 当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测，当附近有显著障碍物时，可适当避开； 当送风口分散布置时，按全室统一布点检测，测点可均布，但不应布置在送风口正下方； 每次采样的最小采样量：100级区域为5.66L，其他各级区域为2.83L； * * * 布点方法 * * 医院洁净手术部建筑技术规范 （GB50333-2002） 6.采样方法：将空气微生物采样器放在室内各采样点，采样高度距地面1.5m，离门窗1m以上，且采样器与采样者保持约50cm的距离，防止采样者身上细菌被吸入采样器，采样完毕，取出采样平皿，立即送检； 采样后的培养皿应立即置于37℃条件下培养24h； * 医院洁净手术部建筑技术规范 （GB50333-2002） 7.撞击法计算公式： 所有平皿菌落数（CFU）×35.34 细菌总数(cfu/m3)＝─────────────── 采样时间（min） 举例：平皿菌落数（1，0，2，1，1，0） 结果为：5×35.34/5=35.3 (cfu/m3) * 注意事项 采样器的标准采样流量是28.3升/分，每次采样前需校正好流量； 避开送风口正下方采样； 穿戴隔离服、口罩、帽子； 每次采样前后用酒精棉擦拭采样器； 尽量少动作，整个操作过程应符合无菌操作的要求； 采样时间最好不超过30分钟； 新房验收时，应最后做空气、物体表面检测。 * * * 谢谢！ * 培养基的分类 1.按照营养组成和用途分类 基础培养基 营养培养基 选择培养基 鉴别培养基 增菌培养基 厌氧培养基 2 .按照培养基的物理状态分：液体、固体和半固体 * 1.按照营养组成和用途分类 1）基础培养基：含有一般细菌生长繁殖所需要的基本营养成分，营养肉汤、营养琼脂等； 2）营养培养基：在基础培养基中加入血液、血清、生长因子等特殊成分，供营养要求较高和需要特殊生长因子的细菌生长繁殖的培养基，如血液琼脂培养基； * 1.按照营养组成和用途分类 3)选择性培养基：在基础培养基中加入抑菌剂，抑制非目的菌生长，选择性的促进目的菌生长，从而将其从混杂的标本中分离出来。如：SS 琼脂培养基； * 1.按照营养组成和用途分类 4)鉴别培养基：在基础培养基中加入某些特定底物,如糖、苷、醇类、氨基酸、蛋白质等和指示剂，用以测定细菌的生化反应，区分不同细菌种类的培养基； 5)增菌培养基：多为液体培养基，如葡萄糖肉汤、GN肉汤等，特别适用于病原菌含量少的标本，因增菌培养基一般含有抑菌剂，具有选择抑制作用，提高标本中含量较少的目的菌的检出率； 6)厌氧培养基：专供厌氧菌的分离、培养和鉴别用的培养基。 * 2、按照物理状态分类 1）液体培养基：可用于大量细菌的生长繁殖，但必须种入纯种细菌，如肉汤培养基； 2）固体培养基：加入1.5~2.0%琼脂，用于细菌的分离和纯化、鉴定及药敏试验等，在试管中可制成斜面用于菌种的短期保存； 3）半固体培养基：加入0.3~0.5%琼脂，用于观察细菌的动力，保存菌种等。 * 配制培养基的一般程序 调配 熔化 矫正pH 过滤 分装 灭菌 保存 * 配制培养基的一般程序 1. 调配：在三角烧瓶中加入少量的蒸馏水，准确称取培养基，混悬于其中，再以剩余的水冲洗瓶壁； 2. 溶化：在电炉上溶解，应随时搅拌，注意防止外溢； 3. 矫正pH值：一般培养基矫正pH至7.2～7.6，亦有需酸性或碱性的培养基，矫正时应比实际需要的pH高0.1～0.2； 4. 过滤澄清：液体培养基，常用滤纸过滤；固体培养基，加热溶化后趁热以两层纱布中间夹脱脂棉过滤； * 配制培养基的一般程序 5. 分装： 基础培养基：一般常分装于三角烧瓶内，灭菌后待用； 琼脂斜面：分装量约为试管的1/4，灭菌后趁热放置斜面，长度2/3； 半固体培养基、液体培养基：分装量约为试管长度的1/3； 琼脂平板：将灭菌或加热融化后的固体培养基，冷至50℃左右，以无菌操作倾注无菌平皿内，平皿内径为9cm，倾注培养基13～15mL，轻摇平皿，使培养基平铺于平皿底部，凝固后备用