穿山龙中薯蓣皂苷元的提取分离及鉴定精选.doc

PAGE 实验四 穿山龙中薯蓣皂苷元的提取分离及鉴定薯蓣皂苷元俗称薯蓣皂素，存在于薯蓣科（Diocoreaceae）植物中，含量约为1～3％。我国薯蓣科植物资源丰富，种类亦多，分布南北各地，其中作为薯蓣皂苷元生产原料的植物主要有盾叶薯蓣（Dioscorea zingiberesis C.H.Wright）俗称黄姜、穿山薯蓣（D．nipponica Makino）俗称穿山龙，用其根茎作为原料提取薯蓣皂苷元。薯蓣皂苷属甾体皂苷，水解可得薯蓣皂苷元，这种甾体皂苷元，是近代制药工业中合成甾体激素和甾体避孕药的重要原料。本实验以穿山龙为原料提取薯蓣皂苷元。穿山龙中含有多种甾体皂苷，根据其水溶性分为水溶性皂苷和水不溶性皂苷。总皂苷水解可得薯蓣皂苷元，其含量可达1.5～2.6％。[目的要求]1、掌握甾体皂苷元的理化性质。2、掌握甾体皂苷元（亲脂性、中性成分）的提取分离方法。3、掌握甾体皂苷元的检识方法。[实验原理]薯蓣皂苷（dioscin）为无定形粉未或针状结晶，mp288℃。可溶于甲醇、乙醇、甲酸，难溶于丙酮和弱极性有机溶剂，不溶于水。薯蓣皂苷元（diosgenin）为白色粉末，mp204～207℃， -129。 （C＝1.4三氯甲烷）。可溶于有机溶剂及甲酸中，不溶于水。薯蓣皂苷元在植物体内与糖结合成苷，经水解（酸水解、酶水解）可得薯蓣皂苷元和糖。利用薯蓣皂苷元不溶于水，溶于有机溶剂的性质，用石油醚连续回流提取，将其从原植物中提取出来。 薯蓣皂苷元 D－葡萄糖 L－鼠李糖薯蓣皂苷 [实验内容]一、预试验 在研究天然药物或中药化学成分时，应首先了解其所含化学成分类型，以便选择一种适当的提取分离方法，这就需要进行化学成分的预试验。预试验分系统预试验和单项预试验。系统预试验旨在全面检查各类成分，单项预试验则是重点检查某类成分，本试验即选择此法。要寻找含皂苷的天然药物或中药，可单纯进行皂苷的试验，具体试验方法采用泡沫试验和溶血试验。1．泡沫试验取穿山龙粗粉1g，加水浸泡（1：10）1小时或置80℃水浴上温浸30分钟，过滤得滤液供以下试验。取供试液2ml于试管中，紧塞试管口后猛力振摇，试管内液体则产生大量的持久性的似蜂窝状泡沫（示有皂苷）。注：含蛋白质和粘液质的水溶液虽也能产生泡沫，但不持久，放置很快消失。2．溶血试验取2％血球悬浮液1ml，加生理盐水8ml，再加用于泡沫试验滤液1ml，混合均匀后放置，几分钟内溶液由红色混浊变成红色透明，产生溶血现象（示有皂苷）。（注：此试验可同时作空白对照以比较现象更为明显。操作方法相同，只以生理盐水lml代替供试液即可）。二、薯蓣皂苷元的提取、分离穿山龙粗粉（50g）置圆底烧瓶中，加水250ml、浓H2SO 420ml， 室温浸泡24小时，文火加热回流4～6小时， 放冷，倾出酸水液酸性药渣用清水漂洗3次，然后将药渣倒入乳钵中，加Na2CO3粉末，反复研磨调PH至中性、水洗、抽干中性药渣 低温（80℃）干燥12小时 干燥药渣置乳钵中研成细粉，置索氏提取器中，以石油醚（60-90℃）为溶剂，连续回流提取4-5小时。 石油醚提取液回收石油醚至剩10-15ml，迅速倾入小三角烧瓶中、放置使充分冷却，滤过 滤液 沉淀用少量冷石油醚洗二次，抽干薯蓣皂苷元粗品无水EtOH或CHCl3-MeOH（9：1）重结晶薯蓣皂苷元精品进行结构改造各种不同的甾体药物三、薯蓣皂苷元的鉴定1．物理常数的测定：测定熔点和旋光。2．化学检识（1）醋酐－浓硫酸反应（Liebermann-Burchard反应）取样品适量，加冰醋酸0.5ml使溶解，续加醋酐0.5ml搅匀，再于溶液的边沿滴加1滴浓硫酸，观察并记录现象。（2）三氯甲烷－浓硫酸反应（Salkowski反应）取样品适量，加三氯甲烷1ml使溶解，沿试管壁加等量的浓硫酸，分别置可见光及紫外灯下，观察并记录现象3．UV鉴定UvλH2SO4maxnm（logε）：334(3.68) 412(4.1) 512(3.52)4．薄层色谱吸附剂：硅胶－CMC薄层板样 品：5%自制薯蓣皂苷元的乙醇液对照品：5%薯蓣皂苷元标准品的乙醇液展开剂：苯-乙酸乙酯（8:2）显色剂： 5%磷钼酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。[实验说明及注意事项]1．原料经酸水解后应充分洗涤呈中性，以免烘干时炭化。2．在干燥水解原料的过程中，应注意压散团块和勤翻动，以利快干。3．在连续回流提取过程中，由于使用的石油醚极易挥发损失，故水浴温度不宜过高，能使石油醚微沸即可。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。4．回收石油醚的蒸馏操作，不必另换蒸馏装置。只将索氏提取器中的滤纸筒取出，再照原