第七章层析分离技术(层析的基本原理与分类精选.doc

宽度与颜色的深浅.自下而上的橘黄色带分别为α胡萝卜素, 胡萝卜素,γ胡萝卜素(...亲和层析也称亲和吸附层析,是利用生物活性物质之间的专一亲和吸附作用而进行的层析..._ 课题 第七章层析分离技术（层析的基本原理与分类基本概念 教学目标：掌握各种层析分离的原理与特点及基本操作技术。 知识内容：1. 层析的基本原理与分类 2. 层析分离的基本操作技术 3. 吸附、离子交换、凝胶、疏水、分配柱层析 4. 气相色谱 5. 高效液相色谱 实验项目：柱层析操作 教学提示：各种层析分离技术常应用于检验。 组织教学 2 min 新课导入 3 min 第七章 层析分离技术 第一节 层析的基本原理与分类（概述） 一、层析分离的基本原理与特点 min （一）基本原理 层析分离是一种物理的分离方法，利用多组分混合物中各组分物理化学性质的差别，使各组分以不同的程度分布在两个相中。其中一相是固定相，通常为表面积很大的或多孔性固体；另一相是流动相，是液体或气体。当流动相流过固定相时，由于物质在两相间的分配情况不同，经过多次差别分配而达到分离，或者说，易于分配于固定相中的物质移动速度慢，易于分配于流动相中的物质移动速度快，因而逐步分离。 （二）与其他分离纯化方法相比，层析分离具有如下基本特点 板书重点板书 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页）教学内容与设计： （l）分离效率高色谱分离的效率是所有分离纯化技术中最高的。 （2）应用范围广从极性到非极性、离子型到非离子型、小分子到大分子、无机到有机及生物活性物质，以及热稳定到热不稳定的化合物，都可用色谱法分离。 （3）选择性强色谱分离可变参数之多也是其他分离技术无法相比的，因而具有很强的选择性。 （4）设备简单，操作方便，且不含强烈的操作条件，因而不容易使物质变性，特别适用于稳定的大分子有机化合物。 层析法的缺点是处理量小、操作周期长、不能连续操作，因此主要用于实验室，工业生产上还应用较少 （三）层析的基本概念 1.固定相 固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质，也可以是液体物质，这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附，溶解，交换等作用。它对层析的效果起着关键的作用。 2.流动相 在层析过程中，推动固定相上待分离的物质朝着一个方向移动的液体、气体或租临界体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。它也是层析分离中的重要影响因素之一。 3.分配系数及迁移率（或比移值） 分配系数是指在一定的条件下，某种组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比值，常用K来表示。分配系数是层析中分离纯化物质的主要依据。 迁移率（或比移值）是指：在一定条件下，在相同的时间内某一组分在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值，常用R,来表示（Rr1）。。 分配系数或迁移率的差异程度是决定几种物质采用层析方法能否分离的先决条件。很显然，差异越大，分离效果越理想。4.分辨率（或分离度） 分辨率一般定义为：相邻两个峰的分开程度。用R，来表示。 5.正相色谱与反相色谱 正相色谱是指固定相的极性高于流动相的极性，因此，在这种层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度快，先从柱中流出来。 反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性，在这种层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度快而先从柱中流出。 一般来说，分离纯化极性大的分子（带电离子等）采用正相色谱（或正相柱），而分离纯化极性小的有机分子（有机酸、醇、酚等）多采用反相色谱（或反相柱）。 副板书 提问：结合天然药化的内容想一想，何谓分配系数？它的意义何在？ 黑龙江生物科技职业学院教案（第 页） 教学内容与设计：6.操作容量（或交换容量） 在一定条件下，某种组分与基质（固定相）反应达到平衡时，存在于基质上的饱和容量，我们称为操作容量（或交换容量）。它的单位是mg/g（基质）或mg/ml（基质），数值越大，表明基质对该物质的亲和力越强。应当注意，同一种基质对不同种类分子的操作容量是不相同的，这主要是由于分子大小（空间效应）、带电荷的多少、溶剂的性质等多种因素的影响。因此，实际操作时，加人的样品量要尽量少些，特别是生物大分子，样品的加人量更要进行控制，否则用层析办法不能得到有效的分离 二、层析分离技术的分类min （一）依操作形式分 或根据固定相基质的形式分类，层析可以分为纸层析、薄层层析和柱层析。 1、纸层析：是指以滤纸作为基质的层析。 2、薄层层析：是将基质在玻璃或塑料等光滑表面铺成一薄层，在薄层上进行层析。 3、柱层析：则是指将基质填装在管中形成柱形，在柱中进行层析。 纸层析和薄层层析主要适用