MF15M5固定包埋组织RNA快速提取试剂盒.doc

M5固定包埋组织RNA快速提取 试剂盒使用说明书 产品名称 单位 货号 M5固定包埋组织RNA快速提取试剂盒 50T MF150-01 【储存条件】 室温储存12个月不影响使用效果。本试剂盒所有溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，可在37?C水浴加热几分钟，恢复澄清后再使用。 【产品简介】 本试剂盒设计用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA。独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞释放出RNA，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase-free H2O将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。 【产品特色】 1. 完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 2. 快速，简捷，单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。 3. 试剂盒的独家基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。 4. 多次柱漂洗确保RNA高纯度，可直接用于下游各种实验。 【产品组份】 50T 注意事项 裂解液PKD 15ml 室温密闭干燥保存 结合液RBC 25ml 室温密闭干燥保存 漂洗液RW 10ml 初次使用前请按瓶标说明加入指定量的无水乙醇 蛋白酶K（40mg/ml） 500μl -20?C保存 RNase-Free H2O 10ml 室温密闭干燥保存 基因组DNA清除套管 50套 室温密闭干燥保存 RNase-Free吸附套管(RA) 50套 室温密闭干燥保存 【注意事项】 1. 所有的离心步骤均在室温完成（4?C离心也可以），使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 需要自备β-巯基乙醇、乙醇（尽量新开封或者RNA专用），研钵。 3. 裂解液PKD 和结合液RBC中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 4. 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时可使用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 5. 预防RNase 污染，应注意以下几方面： 1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。 2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。 3) RNA 在裂解液RLT 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150?C烘烤4 小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。 4) 配制溶液应使用无RNase 的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%( v/v)，37?C放置过夜，高压灭菌。） 6. 关于DNA 的微量残留： 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留，本产品采取了独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA残留（一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见）影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时： 1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 3) 将RNA提取物用RNase-Free的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于D