病原生物学结核病防治基础研究下课件.ppt

;临床样本;结核分枝杆菌快速诊断方法;结核菌分子诊断现状评述;PCR实验室工作平面图;耐药分子诊断方法;Fluoroquinolines;现有诊断试剂的局限性： 经过小规模实验检验 简单、使用方便 昂贵（主要由欧美发达国家研制） 我国的需求： 简单、便宜、可在基层医院使用 重大传染病防治科技重大专项等研究项目：快速诊断试剂研究;简单可行的方法;206;126;818;小结：MDR/XDR TB检测;结核病诊断;Vaccine Develompment;结核疫苗研究历史;Calmette和Guérin分离培养牛结核分枝杆菌，经过200-235次传代，终于得到了具有免疫保护力的减毒的牛型结核分枝杆菌株－Bacille Calmette－Guérin，简称BCG，即卡介苗。 1921年7月对母亲是结核病患者的120名新生儿通过口服途径实施了卡介苗接种，或得了较好的免疫保护效果。 30年代Scandinavian 地区开始使用BCG皮内注射的途径进行免疫，提高了疫苗应用的安全性。 1974年BCG被纳入WHO免疫扩大计划，全世界每年有近1亿的儿童接受预防性免疫接种。 ;新型结核疫苗研究背景;Andersen p, Nature Review Immunology, 2005; 3:656;Cited from Agger EM. Vaccine, 2002; 21:7-14;Sensitisation with environmental Mycobacteria blocks the activity of the BCG vaccine but not subunit vaccines.;新型疫苗发展策略; 新型结核疫苗类型; ;减毒活疫苗BCG;卡介苗免疫保护效果; BCG保护作用差异大的原因;BCG所缺失的结核杆菌特异性基因组区域;重组BCG疫苗研究;重组BCG疫苗的优点;重组BCG疫苗;构建重组BCG疫苗示意图;;pMV261（染色体外） 与 pMV361（染色体内）;;重组Mtb RD1-2F9 BCG疫苗免疫保护活性增强—细菌清除率改变;重组Mtb RD1-2F9 BCG疫苗免疫保护活性增强—脾脏组织观察;;rBCG30免疫保护性增强—体重变化;rBCG30 免疫保护性增强—肺脏和肝脏组织学观察;亚单位疫苗 ;结核蛋白/多肽疫苗概述;;从培养滤液中分离鉴定出有免疫原性的蛋白质有：ESAT-6、Ag85B、Mtb8.4、Mtb32A、MPT64和一38kD蛋白（PstS-1）等。其中Ag85B免疫原性被认为最强。 近来的研究发现Ag85B和ESAT-6的融合蛋白免疫原性更强。 ;;The antigens selected for TB vaccine;30kD分泌蛋白(Ag85)的免疫原性 ——T细胞增殖反应;亚单位疫苗的特点;引自Mustafa AS. Molecular Immunology, 2002; 39:113;亚单位疫苗佐剂;抗原位置决定它们被呈递给不同的T 细胞 ;寻找有效的佐剂;此后，他们发现单磷酸类脂A（MPL）和DDA的混合物能更好地增强小分子蛋白ESAT-6以及ESAT-6和Ag85B融合蛋白的免疫原性，增强他们的抗结核保护力。;;对于疫苗的转运方式，学者尝试用微球体来转运，并证明这对于达到一个以细胞免疫为主的并具有持久的免疫记忆力的反应是非常重要的。;;;Evans JT. Vaccine, 2004; 22:1964;胞内细胞因子染色显示CD8+ IFN-γ+ T细胞被激活 ; Trehalose dimycolate (TDM)和 HSP65 DNA包裹入PLG微球体极大地增强了疫苗的免疫效果。;单一剂量Hsp65-TDM-PLG微球体诱导产生较强的免疫保护力;应用于结核亚单位疫苗的佐剂;细胞因子增强亚单位疫苗的免疫保护力;Construction of a fusion protein AMM ;Construction of fusion protein AMH ;Adjuvant for protein vaccine; BCG cells were sonicated and the suspension was mixed with double volume 45% phenol－natrium aceticum. Then it was heated to 68 ℃ for 30 min, the supernatants was concentrated and double volume of frosty ethanol were added. The mixture was washed three times with ethanol and