23-动物细胞工程.ppt

动 物 细 胞 工 程 大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 作为基因工程中的受体细胞 用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 培养正常或各种病变细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 * 郑集高级中学 菁华生物组 1.动物的细胞培养与体细胞克隆（A） 2.细胞融合与单克隆抗体（A） 考纲要求： ①、无菌、无毒的环境(如何控制？) ②、必备营养成分(应注意什么问题？) ③、温度和PH(作用？ ) 　　 ④、气体成分(有哪些？分别有什么作用？) 1.原理 2.材料选择及原因 3.一般过程 4.培养条件 5.主要应用 幼龄动物的组织、器官或动物胚胎； 细胞分化程度低，分裂能力强。 细胞增殖 一、动物细胞培养： 是其他动物细胞工程技术的基础 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 胰蛋白酶 加培养液 过程 细胞产生接触抑制，停止增殖，出现第一次危机 分瓶培养 细胞增殖缓慢， 甚至停止，出现第二次危机 遗传物质突变 贴壁生长 剪碎 胰蛋白酶 作用？用量？ 处理时间？ 动物细胞培养的条件: 1）无菌无毒的环境： 适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃。 适宜的PH：7.2-7.4 液体合成培养基：（糖、氨基酸）、促生长因子、 （水、无机盐、微量元素）等； 通常还需加入血浆、血清等天然成分。 4）气体环境： 2）营养： 3）温度和pH： “95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。 氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的PH。 ①对培养液和所有培养用具无菌处理； ②培养液中添加抗生素防止培养过程中污染； ③定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。 使用时需要注意的问题？ 为何动物细胞培养必须加入血清？ 动物细胞培养的应用： 细胞的全能性 细胞群 细胞株、细胞系 植株 培养结果 获得细胞或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、血清、血浆 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基状态 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物组织培养和动物细胞培养的比较 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 原理： 供体细胞的选择及原因： 受体细胞的选择及原因： 动物细胞核的全能性 取供体动物的体细胞培养,一般选用传代10代以内的细胞 因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型 选择减Ⅱ中期的卵母细胞作为受体细胞 ①细胞大,易于操作; ②卵黄多,营养丰富,为发育提供充足的营养; ③细胞质中含有某种能激发动物细胞核全能性表达的物质 类型： 操作流程： 胚胎细胞核移植和体细胞核移植 应用： 存在问题： 1、加速家畜的遗传改良，促进优良畜群繁育 2、保护濒危物种 3、生产珍贵的医用蛋白 4、克隆器官作为器官移植的供体 1、成活率低 2、克隆动物的健康问题 3、克隆动物食品的安全性问题 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 使用的技术手段： 体细胞核移植、动物细胞培养、胚胎移植 三、动物细胞融合 原理： 诱导融合方法： 应用： 细胞膜的流动性 物理方法(细胞融合效率高、伤害小、易操作) 化学方法 生物方法：灭活的病毒 最重要的应用是制备单克隆抗体 四、单克隆抗体的制备 1、传统技术生产抗体的方法及缺点？ 2、为什么要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的效应B淋巴细胞？ 3、体外培养条件下， B淋巴细胞的缺点？怎样解决这一问题？ 传统的方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生 抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。 缺点：产量低、纯度低、特异性差 每一个B淋巴细胞只能产生一种特异性抗体。 体外培养条件下，B淋巴细胞不可能无限增殖 如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞就能大量增殖，产生足够数量的特异性抗体 四、单克隆抗体的制备 思考： 1、本过程利用了哪些生物技术？ 细胞融合和动物细胞培养 2、整个制备过程中两次筛选的目的和方法? 第一次筛选得到杂交瘤细胞（从3种主要融合细胞中） 选择性培养基上, 浆细胞、瘤细胞、BB融合细胞、瘤瘤融合细胞都会死亡,只有融合的杂种细胞(杂交瘤细胞)才能生长 第二次筛选得到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞。 多孔培养板上分开进行克隆化培养和抗体检测 与常规抗体相比，具有特异性强、灵敏度高、可大量制备的优点。 3、杂交瘤细胞的特点： 4、单克隆抗体最主要的优点： 既能迅速大量繁殖，又能产生专一的抗体 *