1.2 基因工程的基本操作程序31张.ppt

目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、化学方法人工合成 复制原点 +启动子+目的基因 + 终止子 + 标记基因 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射法、Ca2+处理法 DNA分子杂交、DNA-mRNA分子杂交、抗原—抗体杂交技术 个体生物学水平鉴定 课堂小结 外显子 内含子 与RNA聚合酶结合位点 编码区 非编码区 非编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶结合位点 编码区 原核生物基因 真核生物基因 * * DNA 基因工程的工具 限制酶 来源：主要存在于原核生物中 作用：切断磷酸二酯键 结果：产生平末端和黏性末端 DNA连 接酶 作用：连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 体 具备的 条件 对受体细胞无害 能自我复制并稳定存在 有一个多个限制酶切位点 有标记基因 常用载体： 质粒、λ噬菌体衍生物、动植物病毒 1.2　基因工程的基本 　　操 作 程 序 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的表达和检测 思考: 转基因生物的大致培育过程? 基因工程的目的基因－－ 　　从供体转移到受体的基因，主要指编码蛋白质的结构基因。 与生物抗逆性相关的基因 与优良品质相关的基因 与生物药物和保健品相关的基因 与毒物降解相关的基因 与工业所需酶相关的基因 具有调控作用的因子 …… 1、获取目的基因的方法有哪些？ 2、什么叫基因文库，它包括哪些种类？ 3、用PCR技术扩增基因需要哪些原料？ 一、目的基因的获取 获取方法： 从基因文库中获取目的基因 利用PCR技术扩增目的基因 化学方法人工合成:DNA合成仪 基因文库： 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 (CDNA文库) 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 1、从基因文库中获取目的基因 限制酶 与运载体连接 导入 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接 导入 部分基因文库 （cDNA文库） mRNA RNA－DNA杂合双链 单链DNA 双链DNA RNA病毒逆转录的过程 逆转录酶 DNA聚合酶 2、利用PCR技术扩增目的基因 多聚酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 PCR扩增仪 高温变性 中温延伸 低温复性 PCR PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增 细胞内复制 .VS. PCR扩增 DNA母链 4种　脱氧核苷酸 DNA聚合酶（Taq 酶） 引物（2个） 温度控制 1）模板： 2）原料： 3）酶： DNA母链 4种　脱氧核苷酸 解旋酶 DNA聚合酶 DNA增殖 4）特点: 半保留复制 边解旋边复制 半保留复制 全解旋再复制 3.人工合成目的基因 DNA合成仪 基因表达载体包括哪些必需组分？ 各组分有什么作用？ 二.基因表达载体的构建 基因表达载体的模式图 基因表达除含有目的基因外，还需要以下元件： 启动子 终止子 标记基因 基因表达载体的构建过程 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 什么是转化？ 将目的基因导入植物、动物、微生物细胞的方法分别有哪些？ 三.将目的基因导入受体细胞 转化： 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的方法 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射技术 感受态法 受体细胞 植物细胞 动物细胞 原核细胞 1.将目的基因导入植物细胞----农杆菌转化法 适用于 单子叶植物 基因枪法 胚珠 花药 花丝 柱头 花柱 子房壁 子房 雄蕊 雌蕊 花粉管通道法 适用于 被子植物 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 提纯基因表达载体 体外显微注射入受精卵 受精卵移植 显微注射技术 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 3.将目的基因导入微生物细胞 Ca2+处理法 DNA分子杂交法 个体水平 目的基因是否翻译 目的基因是否转录 目的基因是否导入 分子水平 方法 检测对象 四、目的基因的检测与鉴定 基因探针，是