1.2基因工程的基本操作程序（75张PPT）.ppt

①方法： ②程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法、用Ca2+处理细胞 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 人的糖蛋白必须经内质网和高尔基体进一步加工合成，通过转基因技术，可以使人的糖蛋白基因得以表达的受体细胞是（　） A.大肠杆菌　 B.酵母菌 C.噬菌体　 D.质粒DNA 如图是利用基因工程技术生产可食用疫苗的部分过程，其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶．下列有关说法中正确的是(　　) A.图示过程是基因工程的核心步骤，所需的限制性核酸内切酶均来自原核生物 B.图示中构建基因表达载体时，需用到一种限制性核酸内切酶 C.一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的核糖核苷酸序列 D.抗卡那霉素基因的存在有利于将含有抗原基因的细胞筛选出来 D 此表达载体构建时需要用到EcoRⅠ、PstⅠ限制性核酸内切酶，B错误 C 下列关于核酸分子杂交和抗原-抗体杂交的叙述，正确的是(　　) A.核酸分子杂交是指两条脱氧核苷酸链的杂交 B.抗原-抗体杂交的原理为碱基互补配对原则 C.核酸分子杂交可检测目的基因的存在和转录 D.抗原-抗体杂交中目的基因产物常作为抗体 A、核酸分子杂交是指两条核苷酸链的杂交，A错误；B、抗原-抗体杂交的原理为抗体与抗原特异性结合，B错误；C、核酸分子杂交可检测目的基因的存在和转录，C正确；D、抗原-抗体杂交中目的基因产物常作为抗原，D错误 如图1表示含有目的基因的DNA?片段和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶切割的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．下列叙述正确的是(　　)A.上述4种限制性核酸内切酶中BamHⅠ、MboⅠ切出的粘性末端不相同 B.BamHⅠ、MboⅠ酶切DNA后加DNA连接酶重新拼接，都能被MboⅠ再次切割 C.MspⅠ、SmaⅠ切出的两个末端可以用DNA连接酶相互连接 D.最终构建的基因表达载体上会同时含有抗生素A、B抗性基因 B 科学家运用基因工程技术将人的胰岛素基因与大肠杆菌的质粒DNA分子重组，并且在大肠杆菌体内获得成功表达．如图所示a处为胰岛素基因与大肠杆菌质粒DNA结合的位置，它们彼此能结合的依据是(　　) A.基因自由组合定律 B.半保留复制原则 C.基因分离定律 D.碱基互补配对原则 D 如图为重组质粒形成示意图．?将此重组质粒导入大肠杆菌，然后将大肠杆菌放在四种培养基中培养：a-无抗生素的培养基，b-含四环素的培养基，c-含氨苄青霉素的培养基，d-含四环素和氨苄青霉素的培养基．含重组质粒的大肠杆菌能生长的是(　　) A.A B.a和c C.a和B D.b和c B 4、基因表达载体的功能： 通过基因表达载体将目的基因导入受体细胞 ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 注意 (1)切割目的基因和运载体时并非只能用一种酶，但无论用几种酶，一般都用相同种类的酶切割目的基因和运载体。 (2)启动子≠起始密码，终止子≠终止密码。 启动子和终止子位于基因结构的非编码区，起始密码和终止密码位于mRNA上。 三、将目的基因导入受体细胞P11-13 （一）转化概念： （二）方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞 目的基因进入_________ 内，并且在受体细胞内维持_____ 和_____ 的过程 受体细胞 稳定 表达 （1）农杆菌转化法 易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数单子叶植物没有感染能力 Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 1、将目的基因导入植物细胞的方法： ①农杆菌特点： ②原理： Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 ③过程： ④优点: 比较经济和有效 基因枪法又称微弹轰击法，是利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒表面的表达载体D