中学联盟四川省乐山外国语学校生物（人教版）选修一：专题2课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（共30张PPT）.ppt

1、尿素的利用 尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 3、知识扩展：常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、 棒状杆菌、梭状芽胞杆菌及某些真菌和放线菌 （一）筛选菌株 （一）筛选菌株 （一）筛选菌株1、选择培养基： 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 2、菌株： 纯且活状态所保存的菌种 。 （二）统计菌落数目： 2、间接计数法、活菌计数法（常用的方法：稀释涂布平板法） （1）原理： 1个菌落→1个活菌 （2）操作方法： 稀释菌液--﹥涂布平板→统计菌落数 （3）统计原则 ①选 30～300 个菌落的平板统计 ②每个稀释度取3个平板取其平均值 3、滤膜法测定细菌的数目：（以大肠杆菌为例） 方法：将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。 结果：在该培养基上计数出现黑色菌落的数目即计算出大肠杆菌的数量 三、实验设计 包括：对实验方案、所需仪器、材料、用具和药品、具体的实施步骤以及时间安排等 （五）微生物的培养与观察 不同种类的微生物，需要不同的培养温度 和时间。 1、培养： 细菌：30～37℃，1～2d; 放线菌:25～28℃, 5～7d; 霉菌: 25～28℃, 3～4d. 2、观察： a.每24h统计一次菌落数目 b.以“稳定菌落”为观察对象 　　 * * 课题2 土壤中分解尿素的细菌的 分离与计数 细菌脲酶 一、课题背景 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 2、细菌利用尿素的原因： 是因为这些细菌能够合成分解尿素的脲酶 4、本课题的目的： 1、从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 2、统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌. 二、研究思路 （一）筛选菌株 （二）统计菌落数目 （三）设置对照 二、研究思路 1、实例：PCR技术：一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。 提出的问题 —如何寻找耐高温的DNA聚合酶？ 解决问题的思路 —寻找耐高温环境； 原因：高温条件淘汰了绝大多数微生物 二、研究思路 获得启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 得出实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、PH等），同时抑制或阻止其他微生物的生长。 （一）筛选菌株KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有产生脲酶的 细菌能利用尿素作为氮源而生存。 （二）统计菌落数目： 1、显微镜直接计数 原理:利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 具体做法：在容积为0.1mm3或0.4mm3的计数室有400个小格组成，将稀释后的样液滴在计数板上，盖上盖玻片，在显微镜下计数4-5个中方格中的细菌数，并求出每小格所含的平均数，用公式： 每毫升原液所含细菌数=每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数 优点：能准确统计微生物的实际数目。 缺点：不能区分死菌和活菌、不适于对运动细菌的计数、需要相对高的细菌浓度、个体小的细菌不容易在显微镜下观察计数 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同 一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为 106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 （二）统计菌落数目 2、活菌计数法 （