中学联盟广东省台山市华侨中学2016-2017学年高二生物人教版选修一课件：5.1DNA的粗提取和鉴定 (共22张PPT).ppt

* * * * 课题1 DNA的粗提取与鉴定 染色体成分 蛋白质 RNA(少量) DNA 提取DNA的基本思路： 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 * DNA的粗提取与鉴定 1．原理、方法和目的 基本原理 方法 目的 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低 溶于NaCl溶液中并稀释 ①NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质 DNA不溶于酒精溶液 加入冷却酒精(95%) DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 DNA可被二苯胺染成蓝色 加入二苯胺，并沸水浴 鉴定DNA DNA对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 加入洗涤剂 * 2.实验材料①动物 鸡血细胞液的优点 提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作为DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。 鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的DNA,既经济又易取 ②植物：新鲜菜花、菠菜等。 * 3、方法与过程 1).制鸡血细胞液 0.1g/mL柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心或静置沉淀。 离心或静置后去掉上清液 血浆 血细胞 * 关于DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验结果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题： （1）鸡血中红细胞 ，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中 细胞数目较多，可以提供丰富的 （2）实验前由老师制备鸡血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是 （3）生活在牧区的人们，采集羊、牛和马血比较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是 ， 这是因为 ， 但若改用动物肝脏做实验材料，实验可以顺利进行，这是因为 。 （4）若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加 程序，使组织细胞更易分离。 含有完整的细胞核,含有较多DNA 红 DNA量，所以一般采用鸡血 鸡的全血包括血浆和血细胞，血浆中无DNA，全血中除掉血浆后就是浓缩的血细胞液，DNA的相对含量提高了。 在实验中很难提取到DNA 哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核，反靠白细胞 和淋巴细胞中的少量DNA，在实验中很难提取到 肝细胞中含有细胞核，并且肝组织容易被破坏，有利于DNA的提取 若使肝组织易分离，将肝细胞剪碎、研磨是一种简便易行的方法。 * 提取细胞核物质： 溶解核内DNA：在滤液中加2mol/L的NaCl溶液并搅拌，使染色质中DNA 与蛋白质分离，DNA充分溶解，过滤(除杂质) 析出DNA： DNA黏稠物再溶解：在烧杯中用2mol/L的NaCl溶液溶解DNA。 提取较纯净的DNA： DNA的鉴定：取两试管各加2mol/L的NaCl溶液，将DNA充分溶解于其 中一试管，然后向两试管加入二苯胺试剂，混匀沸水中加热 5min后冷却，可发现DNA与试剂反应使溶液呈现蓝色。 滤取DNA黏稠物： 过滤含DNA的NaCl溶液：用两层纱布过滤。 2)实验方法步骤： 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。 用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。 滤液中含有DNA。 所得的滤液＋体积分数为95%的