中学联盟浙江省杭州市西湖高级中学（浙教版）高二生物选修一课件：第一部分 实验2 分离以尿素为氮源的微生物 （共26张PPT）.ppt

实验2 分离以尿素为氮 源的微生物 任务1：怎么从土壤中分离出能分解尿素并将其作为氮源的微生物呢？ 利用以尿素为唯一氮源 的培养基进行筛选。 （1）将土壤中的固氮菌分离出来 （2）将土壤中自养微生物分离出来 举一反三 （3）筛选出抗青霉素的微生物 （4）筛选出耐高浓度食盐的微生物 …… 配制培养基 尿素培养基25ml 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 水 15ml 尿素 10ml 功能上是选择培养基 琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物 琼脂糖不含氮元素，但有固化作用。 物理性质（形态）上是固体培养基 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制和阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 配制培养基 尿素培养基25ml 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 水 15ml 尿素 10ml 琼脂糖 0.5g 琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物 琼脂糖不含氮元素，但有固化作用。 1、通过什么方法可以判断细菌确实能将尿素分解成氨。 思考： 方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若指示剂变红，说明该种菌能将尿素分解成氨。 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml 水 15ml 细菌 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： 黄色 红色 (变色范围 pH6.4-8.2) 任务1：怎么从土壤中分离出它们呢？ 利用以尿素为唯一氮源 的培养基进行筛选。 2、要验证以尿素为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实具有选择作用，你 该如何设计实验。 思考： 配制培养基 尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml LB培养基 蛋白胨： 0.25g 酵母粉： 0.12g NaCl： 0.25g 琼脂糖： 0.5g 对照组 选择培养基 实验组 二、实验目的: 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶) 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应) 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量 三、实验中涉及到的一些问题： （一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题） （二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？ （三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？ （四）统计微生物的数量可用哪些方法？ 没硬化，腐殖质丰富的土壤 碳源、尿素、无机盐、水、酚红 培养基红色的深浅和区域的大小 稀释涂布平板法，显微镜直接计数法 三、实验中涉及到的一些问题： （五）用稀释涂布平板法计数时，菌落数在30-300计数。 重复性原则 对照原则 （排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度） 做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度 （六）实验设计要遵循的原则： 过滤灭菌后的尿素 （二）制备细菌悬液 制备成10-2、10-3、10-4、10-5 土壤稀释液 配制菌悬液 1个99ml无菌水 2个4.5ml无菌水 得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液 1g土壤 倒平板 需要倒3个LB平板，9个尿素平板 LB(对照) 尿素 10-3 10-4 10-5 每个稀释度 1个LB对照平板