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人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养(共49张PPT)
编号 成分 含量 ① 粉状硫 10g ② (NH4)2SO4 0.4g ③ K2HPO4 4.0g ④ MgSO4 9.25g ⑤ FeSO4 0.5g ⑥ CaCl2 0.5g ⑦ H2O 100ml 例3.右表是某微生物培养基成分,请据此回答: (1)右表培养基可培养的微生物类型 是 。 (2)若不慎将过量NaCl加入培养基中。 如不想浪费此培养基,可再加入 . 自养型微生物 含碳有机物 (3)若除去成分②,加入(CH2O),该培养基可用于培养 。 (4)表中营养成分共有 类。 固氮微生物 3 调整pH 编号 成分 含量 ① 粉状硫 10g ② (NH4)2SO4 0.4g ③ K2HPO4 4.0g ④ MgSO4 9.25g ⑤ FeSO4 0.5g ⑥ CaCl2 0.5g ⑦ H2O 100ml 例3.右表是某微生物培养基成分,请据此回答: (5)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是 。 编号 成分 含量 ① 粉状硫 10g ② (NH4)2SO4 0.4g ③ K2HPO4 4.0g ④ MgSO4 9.25g ⑤ FeSO4 0.5g ⑥ CaCl2 0.5g ⑦ H2O 100ml 例3.右表是某微生物培养基成分,请据此回答: (6)右表中各成分重量确定的原则是 。 (7)若右表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分是 。 依微生物的生长需要确定 琼脂(或凝固剂) 微生物数量的计算 直接计数法 间接计数法 (一)直接计数法 ——显微镜直接计数法 将待测样品制成悬液,然后取一定量的悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微镜下观察到的微生物数目来计算出体积内的微生物总数。一般适用于纯培养悬浮液中单细胞菌体的计数。 优点:直观、快速、操作简单 缺点: 不能区分死菌与活菌,所得为总数,结果往往偏高 不适于对运动细菌的计数 需要相对高的细菌浓度 个体小的细菌在显微镜下难以观察 1、血球计数板 计数板是一块特制的厚玻璃片,玻片上有四个槽构成三个平台,中央平台又由一短槽隔成两半,其上各刻有一小方格网。 每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数室。 计数室体积为l×0.1=0.1mm3。 (注意:1 ml = 1000 mm3 ) * * * * # # # # # 血球计数板计数室有两种刻度 1大格=16中格25×16=400小格 1大格=25中格 16 ×25 =400小格 1、稀释 用无菌生理盐水将待测菌稀释成适当浓度的菌悬液。 2、镜检计数室 加样前,先对计数板的计数室进行镜检,若有污物,则用自来水冲洗,95%乙醇棉球轻轻擦洗,然后用吸水纸吸干或电吹风吹干。 3、加样 取洁净的血球计数板一块,盖上盖玻片。将菌悬液摇匀,用无菌滴管吸取少许,沿盖玻片边缘滴入一小滴,让菌液利用液体的表面张力充满计数区,静置5min。 注:取样时先要摇匀菌液,加样时计数室不可有气泡产生 2、操作步骤 4、显微镜计数(以16小格 ×25中格的 规格为例) 在高倍下(40X)计数对两个计数室记数,方法:每个计数室选5个中格(4个角和中央的一个中格)中的菌体进行计数,求得每个中方格的平均值,再乘上25即为大方格中的总菌数,最后换算成1ml菌液中的总菌数。 注:依照“数上不数下,数左不数右“的原则进行计数 计数时应不时调节焦距,才能观察到不同深度的菌体 一般样品稀释度要求每小格内约有5—10个菌体为宜 计数的结果是两个计数室所记菌数的平均值 5、清洗血球计数板 计数完毕,将血球计数板在水龙头下流水冲洗干净,切勿用硬物洗刷,洗完后电吹风吹干,镜检确认计数区无残留菌体或其它沉淀。若不干净,则必须重复洗涤至干净为止。 3、计数方法 所统计的5个中格的总菌数A,菌液的稀释倍数为B,则1ml菌液含有的菌数为: 1大格子=25中格 (二)间接计数法 ——稀释平板计数法 将待测样品按比例做一系列稀释后,将其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定稀释度、一定量的稀释样液接种到平板上,使其均匀分布于平板中的培养基内;或是将一定量的稀释液,与溶化后冷却至45℃左右的琼脂培养基混合,倾入无菌培养皿中,摇匀、静置待凝。 经过培养,由单个微生物生长繁殖而形成肉眼可见
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