人教版选修1专题2课题1微生物的实验室培养（共83张PPT）.ppt

选择培养基 （六）菌落计数 选取某稀释度下有2-3个平板中菌落数在30-300的平板计数，求菌落数的平均值，再根据公式计算菌种数。 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。 3.梯度稀释 101 102 103 104 105 106 4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上 （1）制备鉴别培养基: （2）涂布平板： 将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1ml涂布到平板培养基上，30℃倒置培养。 方法二 方法一 缺点 优点 染色法 5.刚果红染色法 方法一：先 ，再加入刚果红进行颜色反应。 方法二：在 时就加入刚果红。 〖旁栏思考题〗这两种方法各有哪些优点与不足？ 培养微生物 倒平板 颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 操作繁琐 刚果红会使菌落之间发生混杂 操作简便不存在菌落混杂问题 产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈， 有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。 方法一中NaCl溶液的作用？ 思考： 漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，以免出现的透明圈不够清晰。用这方法可以判断酶活力的大小，实际上刚果红是结合到培养基的多糖底物，但分解纤维素的细菌可以产生纤维素酶，能分解这个多糖底物成为单糖，这样刚果红就不能结合上去了，氯化钠溶液就可以使结合不牢的刚果红洗去，这样就留下大大小小的透明圈，大的透明圈当然分解纤维素的能就强！ 三.结果分析与评价 ㈠.实验样品选择可以在树林富含腐殖土中取样，其环境表现为潮湿、枯枝落叶多。分解纤维素的菌数量多。 ㈡.提示：利用纤维素分解菌的选择培养基，经富集培养后梯度稀释，经鉴别培养基培养，就能够分离到能够产生透明圈的微生物，它们是纤维素分解菌或者是真菌。 ㈢.提示：分解纤维素的微生物有很多，有真菌、放线菌及细菌。 四.课外延伸 阅读“课题延伸”，回答： 1.为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行 实验，纤维素酶的发酵方法有 发酵和 发酵。 2.纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的 含量进行定量测定。 发酵产纤维素酶 液体 固体 葡萄糖 分解纤维素的微生物的分离 纤维素酶 种类、作用、催化活力 刚果红染色 筛选原理 实验设计 土壤取样 选择培养 涂布培养 纯化培养 前置染色法 后置染色法 富含纤维素土壤 增大分解菌含量 染色鉴别 分离出分解菌 课堂总结 培养基成分分析 水 溶解后，蒸馏水定容至1000mL 氮素、生长因子 水解酵素 0.5g 生长因子、碳源、氮源 酵母膏 0.5g 无机盐 KCl 0.5g Na2HPO4·7H2O 1.2g KH2PO4 0.9g MgSO4 ·7H2O 0.5g 氮源、无机盐 NaNO3 1g 碳源（能源） 纤维素粉 5g 提供主要的营养物质 培养基组成 氢元素、氧元素 上述物质溶解后，加蒸馏水定容至1000mL 凝固剂 琼脂 15g 碳源、生长因子 土豆汁 100mL 无机盐 KH2PO4 0.25g 碳源、氮源、生长因子 酵母膏 1g 碳源 CMC-Na 5~10g 提供的主要营养物质 培养基组成 鉴别纤维素分解菌的培养基 (水溶性羧甲基纤维素钠) 之后讲课本P22的最上面内容 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 对位训练 1.分离土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是 （ ） ①加尿素 ②不加尿素 ③加琼脂 ④不加琼脂 ⑤加葡萄糖 ⑥不加葡萄糖 ⑦加硝酸盐 ⑧不 加硝酸盐 A.①③⑤⑦ B.②④⑥⑧ C.①③⑤⑧ D.①④⑥⑦ C 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 ㈢.设置对照： 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误 小结：通过这个事例可以