人教版选修1专题3课题2月季的花药培养（共27张PPT）.ppt

3.2月季的花药培养 花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞 一、被子植物的花粉发育 ②花粉粒的形成 花粉母细胞 （小孢子母细胞） 减数分裂 ①经历时期： 四分体时期、单核期、双核期 四分体时期 （进入单核期） 有丝 分裂 单核靠边期(小孢子) 单核居中期(小孢子) 小孢子 （单核花粉粒） 精子 精子 有丝 分裂 花粉管细胞核 生殖细胞核 生殖细胞 营养细胞 双核期 两个精子和一个营养核的基因型相同 二、产生花粉植株的两条途径 三、影响花药培养的因素 1、材料的选择 接种的花药时期 ②选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的重要因素 选材是否成功是花药培养成功的关键 ①选材 一般来说，在单核期，花药培养的成功率最高。即：单核靠边期 选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易破碎； 选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动，又给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核期的花药。 ③花药培养时期的选择 ④其它时期选择的缺点 ⑦花药培养时间 为了挑选到单核期的花药，通常选择完全未开放的花蕾。盛开的或略微开放的花，都不宜选作实验材料。 ⑥选择完全未开放花蕾的原因 完全未开放的花蕾，可挑选到单核期的花药，菌少、易消毒 ⑤单核期花药的挑选 月季的初花期。初花期的花蕾营养状态及生理状态会比较好，可能提高花粉的诱导成功率 月季花药培养时的花粉粒最好是（ ） A、四分体时期 B、单核居中期 C、单核靠边期 D、二核或三核花粉粒 C 2、培养基： 花药培养基所采用的培养基可能因植物的不同而有所变化小麦中为N6，马铃薯、月季中为MS，油菜中为B5培养基 3、其他因素 亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种的密度等对诱导成功都有一定的影响 六、实验操作 （一）材料的选取 ②某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青-铬矾法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。 ①最常用的方法有醋酸洋红法 1、方法 ①醋酸洋红法染色机理 醋酸洋红为碱性染色剂，而花粉细胞内有染色体，染色体主要成分是DNA和蛋白质,易被碱性染料着色染成红色 。 将体积分数45％的醋酸100ml煮沸，缓缓加入1g洋红，在加热回流8h，冷却至50℃，过滤即可。 ②醋酸洋红的配置 2、醋酸洋红法 将花药放在载玻片上，加一滴质量分数1％的醋酸洋红，用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片在显微镜下检查。 ③染色操作 3、焙花青—铬钒法 将无水酒精与冰醋酸按体积比为3：1的比例混匀 ①卡诺氏固定液的配制方法 花药应该在卡诺氏固定液中固定20min，然后取出放在载玻片上，加焙花青—铬钒溶液染色，盖上盖玻片后在显微镜下检查。 将5g铬明矾[K2SO4Cr2(SO4)·24H2O]加入90ml蒸馏水中，溶解后加入0.1g焙花青，混匀并加热至沸腾，煮沸5分钟后冷却至室温，过滤，加蒸馏水定容至100ml。 ②焙花青—铬钒溶液的配制方法 ③染色操作 （二）材料的消毒 1、酒精处理 ①花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒，立即取出。 ②无菌水清洗 ③无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分 2、消毒液处理 （三）接种和培养 ① 放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液） ② 无菌水冲洗3~5次 用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即可。 在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成 立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花药7-10个。 1、剥取花药 ①勿损伤花药，以免诱导出非花粉愈伤组织 2、接种 注意： ①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。 3、培养 ②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株 ③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上，否则这些植株将很难分开。 在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，常常会出现染色体倍性的变化（主要原因是营养核和生殖核融合造成的） 4、鉴定和筛选 5、植物组织培养技术与花药培养技术的异同点： 项目 相同点 不同点 植物组织培养技术 离体的植物组织经脱分化形成愈伤组织，再分化成丛芽，诱导出根，然后进行移栽。 外植体为体细胞，染色体数无需加倍。 花药培养技术 取材为花药，培养的为单倍体幼苗，植株弱小，高度不育，必须用秋水仙素处理，使染色体加倍，恢复正常植株的染色体数，而且为纯种。