人教版选修1专题五课题1DNA粗提取与鉴定（共18张PPT）.ppt

实验探究： 　　 　　设计实验进行ＤＮＡ的粗提取和鉴定。 　　 　　要求：以植物细胞为实验材料，对比鸡血细胞中ＤＮＡ的粗提取与鉴定，比较动物细胞和植物细胞在实验设计中的不同点。 （注意：重点分析在细胞破碎方面的差别。） * 课题1 DNA的粗提取与鉴定 专题五 DNA和蛋白质技术 一、提取DNA分子的基本思路 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 二、提取DNA分子的基本原理 原理１:利用ＤＮＡ分子的溶解性 原理２:利用ＤＮＡ分子的耐受性 １、DNA的溶解性 　　①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。 　　②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。 ２、DNA分子的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响； ②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性； ③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响。 三、DNA分子的鉴定 　　DNA与二苯胺（沸水浴５min）会染成蓝色，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。(注意：二苯胺在使用时再配制。) 四、实验设计的注意事项 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 （三）去除滤液中的杂质 （四）DNA的析出与鉴定 （一）实验材料的选取 　　　　　　　鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。 　　　　　　　凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的，以及提取比较容易的生物组织，成功的可能性更大。 １、原则： ２、材料： （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 1、动物细胞 2、植物细胞 　　动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 　　植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜。洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解。 （三）去除滤液中的杂质 　　为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理共三套方案（教材55页）： 方案一: 方案二: 方案三: ＤＮＡ的溶解性 ＤＮＡ不受蛋白酶的影响 ＤＮＡ的耐高温性比较强 （四） DNA的析出与鉴定 　　DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液（体积分数为95％） ，静置2-3min，溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，这就是粗提取DNA。 1、DNA的析出 2、DNA的鉴定 　　鉴定DNA时在试管中先加入浓度为2mol/L 的NaCl溶液5ml于两只试管中，其中一只加入DNA丝状物，各加入二苯胺试剂4ml。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否有蓝色。 观察你提取的DNA颜色，如果不是白色丝状物，说明DNA中的杂质较多；二苯胺鉴定出现蓝色说明实验基本成功，如果不呈现蓝色，可能所提取的DNA含量低，或是实验操作中出现错误，需要重新制备。 (五)、课题成果评价