人教版选修一专题五课题三血红蛋白的提取和分离（共33张PPT）.ppt

课题3 血红蛋白的提取和分离 * * 1、含量：占细胞干重的50％以上，是细胞中含量最多的有机化合物。 2、组成元素：C、H、O、N 3、基本单位：氨基酸 蛋白质小知识 氨基 NH2 COOH 羧基 H R —C— 4、分子结构： 氨基酸 多肽 蛋白质 肽键：—CO—NH— 5、相对分子质量：高分子化合物 蛋白质小知识 脱水缩合 盘曲折叠 1、分离生物大分子的基本思路是什么？ 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 2、蛋白质的分离和提取的原理是什么？ 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附的性质和对其他分子的亲和力，等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 思考 凝胶色谱法（分配色谱法） 1、概念：根据被分离物质（如蛋白质）相对分子质量的大小，利用具有多孔网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。 性质：微小的多孔球体 本质：多糖类化合物 实例：葡聚糖、琼脂糖 凝胶色谱法分离蛋白质 凝胶色谱法（分配色谱法） 2、原理： 当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。 后 先 洗脱次序 较长 较短 运动路程 较慢 较快 运动速度 因扩散进入凝胶颗粒内部而被滞留 被阻挡在凝胶颗粒外面而迅速通过 运动路径 小于凝胶颗粒孔道直径 大于凝胶颗粒孔道直径 直径大小 小 大 相对 分子质量 缓冲溶液 1、概念：在一定的范围内，能对抗外来少量强酸、强碱或稍加稀释不引起溶液pH发生明显变化的溶液。 2、作用：能够抵制外界的酸或碱的对溶液的pH的影响，维持pH基本不变。 3、配制：通常由1－2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同pH范围内使用的缓冲液。 还记得人体血液中的缓冲液吗？ H2CO3 /NaHCO3 NaH2PO4 /Na2HPO4 你认为在血红蛋白整个实验中用的缓冲液是什么？目的是什么？ 本实验使用的是磷酸缓冲液，目的是利用缓冲液模拟细胞内的pH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察（红色）和科学研究（活性）。 电泳 1、概念：指带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 2、原理： ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 3、类型：琼脂糖凝胶电泳、 聚丙烯酰胺凝胶电泳 十二烷基硫酸钠（SDS）—聚丙稀酰胺凝胶电泳 应用：测定蛋白质分子量、进行蛋白质纯度鉴定 原理：蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中的迁移率取决于它所带净电荷的多少以及分子的大小等因素。 SDS：消除净电荷对迁移率的影响。 电泳 实验操作步骤 样品处理——粗分离——纯化——纯度鉴定 水分 血浆 固体物质 血液 白细胞 血细胞 血小板 红细胞 血红蛋白（90％） 血红蛋白的组成 β β α α 血红素基因 可携带一分子O2或一分子CO2 1、 红细胞的洗涤 2、血红蛋白的释放 3、分离血红蛋白溶液 4、透析 （一）样品处理 问题： 1、刚采集的血样要做 怎样的处理？为什么？ 加入抗凝血剂， 防止血液凝固。 2、怎样洗涤？ 采样分离－吸浆倒红－加液搅拌－重洗三次 低速短时间离心 生理盐水 1、红细胞的洗涤 3、洗涤的目的是什么？ 去除杂蛋白，以利于后续血红蛋白的分离纯化。 4、洗涤干净的标志是什么？ 直至上清液不再呈现黄色，表明红细胞已洗涤干净。 1、红细胞的洗涤 2、血红蛋白的释放 问题： 加蒸馏水和甲苯的作用是什么？ 使红细胞破裂，释放出血红蛋白。