人教版选修三专题一《基因工程》课件 （共74张PPT）.ppt

限制酶所识别的序列，无论是6个还是4个碱基，都可以找到一条对称线，由于有一条DNA链上的碱基是对称互补的，从而使两条DNA链上的碱基是反向重复、对称排列的。 想一想限制酶所识别的序列有什么特点？ 比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 不 同 点 连接的DNA 链 链 模板 连接的对象 相同点 作用实质 形成 键 单 双 不要 要 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 磷酸二酯 技术发明 1967年基因转移载体的发现 1970年工具酶的发现 1965年氨基酸测序和1977年DNA测序技术的发明 1972年DNA体外重组的实现 1973年重组DNA表达实验的成功 1980年第一例转基因动物和1983年第一例转基因 植物问世 1988年PCR技术的发明 专题一 基因工程(gene engineering) 1.1 DNA重组技术的基本工具 棉花细胞 (不能抗虫) 抗虫基因 转基因抗虫棉 (能抗虫) 苏云金芽孢杆菌 项 目 内 容 来源 种类及命名 识别序列数目 作用特点 作用结果 主要来源于原核生物 命名：属名头字母（大写）+种名头2字母 +菌株名（通常省略）+罗马数字 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列， 并在特定的位点切割DNA分子。 大多数限制酶的识别序列由 个核苷酸组成 少数的识别序列由 个核苷酸组成 6 4、5或8 产生黏性末端或平末端 种类：现已从300微生物中分离出约4000种限制酶 作用 1、识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列 2、在特定序列的特定位点上切割DNA 断开两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 一、基因工程的基本工具 1、限制（性核酸内切）酶 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 脱氧核苷酸的结构 G 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ 1’ 2’ 3’ 4’ 5’ A 3’,5’-磷酸二酯键 3’端 5’端 3’端 5’端 磷酸二酯键 3’ 5’ * 仔细观察各限制酶 识别的特定序列有何 特点？ 限制酶的识别序列 限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的 ，称为回文序列 中轴线 在G与A之间切割 大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC 序列，并在G和A之间切开。 EcoRI限制酶的作用 　 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRI限制酶的切割 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaI只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。 中轴线 SmaI限制酶的作用 在G与C之间切割 平末端　　　平末端 SmaI限制酶的切割 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 为什么限制酶主要是在原核生物中提取的？你能推测限制酶存在于原核生物中的作用是是什么吗？ 要想获得某个特定性状的目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同种限制酶来切割，会怎样？ 会产生相同的黏性(平)末端 如果把具有相同黏性(平)末端的DNA连接起来，又会怎样呢？ 得到重组DNA 项目 内容 种类 (比较) 作用 对象 原理 结果 E.coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 只作用于 末端 主要作用于 末端，还可作用于 末端 DNA片段 形成磷酸二酯键 黏性 平 黏性 通过形成新的磷酸二酯键，而将两条DNA 的“扶手缝隙”连接起来，形成重组DNA 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来催化形成磷酸二酯键 DNA连接酶的作用 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来 DNA连接酶的缝合作用 可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来， 注意：DNA连接酶可连接双链DNA中的DNA单链缺口，但不能连接单链DNA！ DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ T