人教版高中生物选修三专题一第一节《DNA重组技术的基本工具》课件（共20张PPT）.ppt

问题展示一 限制酶 1、限制酶作用中要点？ 2、限制酶把这个化学键（？）剪断后产生了什么样的结果？ 3、限制酶可以剪切任何长度（两个要点）的序列吗？ 问题展示二 DNA连接酶 1DNA连接酶来自哪两种生物，又被命名为分成哪两类DNA连接酶？ 2 DNA连接酶是连接的限制酶剪切的末端吗？若是，怎么连接？有何不同之处? 3 DNA连接酶与DNA聚合酶作用的区别？（连接DNA链,连接部位,相同点） 问题展示三 载体 1.常用载体是什么？它的概念（用几个词概述其特点）？本质？作为载体的必备条件及作用？天然质粒可不可以作为载体？ 2.除了上述载体外还有什么可以载体？ 基因的载体——“分子运输车” 5.在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（ ） 同种限制酶 B. 两种限制酶 同种连接酶 D. 两种连接酶 DNA重组技术的基本工具 2016.4.27 问题解决 1.限制性核酸内切酶的分布？ 2.限制性核酸内切酶的作用？ 练习；限制性核酸内切酶能不能识别并切割RNA序列？ 主要从原核生物中分离纯化（细菌和霉菌）。 能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间磷酸二酯键断开。 3.内切酶切割DNA后形成的末端——黏性末端、平末端是如何形成的？ 4.识别序列的组成:大多数由六个核苷酸组成 5.切割后产生的DNA片段末端的形式 总结规律: 限制酶所识别的序列有什么特点？ 无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 限制酶在DNA的任何部位都能将DNA切开吗？以下是四种不同限制酶切割形成的DNA片段： (1) …CTGCA??? (2) …AC??? (3) GC… ?? …G??????????? …TG??????? CG…（4） …G????? (5)????G…? (6) …GC ????? …CTTAA???? ACGTC…????? …CG (7) GT…???????(8)AATTC… ???? CA…????????????? G… 你是否能用DNA连接酶将它们连接起来？ 6.限制性核酸内切酶的特点是？ 练习：限制酶与解旋酶作用位点的区别？ 具有特异性。 2. DNA连接酶的作用？E.coliDNA连接酶与T4DNA连接酶作用区别？ DNA连接酶连接的是主链还是氢键？ 差别: E.coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不能将双链DNA片段平末端之间进行连接; T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低. 1.根据来源划分，DNA连接酶的种类？ E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶两种。 问题解决 连接部位 DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 相同点 双链 单链 在两DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加到已存在的DNA片段上,形成磷酸二酯键 都能形成磷酸二酯键， 二者都由蛋白质构成 3.练习：DNA连接酶与DNA聚合酶作用的区别？ 1.常用的载体是？其他载体还有？ 2.质粒的概念？本质？作为载体的必备条件及作用？天然质粒可不可以作为载体？ 常用的是质粒 其他的还有入噬菌体的衍生物和动植物病毒 质粒：裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外的双链环状DNA分子。 本质：双链环状DNA分子。 特性：4点。 A.载体必须具备的条件： 1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存； 2、具有一个多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害，且大小要合适 B.载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 不可以，天然质粒必须经过人工改造才能作为载体。 1、下列不适合用于基因工程的运载体 是（ ） A、质粒 B、噬菌体 C、细菌 D、病毒 选我 C 2、下列说法正确的是：（ ） A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列 B、质粒是基因工程中唯一的运载体 C、重组技术所用的工具酶是限制酶、 连接酶、运载体